Растворитель е 646: Растворитель 646 (Р-646) от производителя с доставкой по России

Разное

Содержание

Растворитель 646 (Р-646) от производителя с доставкой по России


для разбавления нитроцеллюлозных лакокрасочных материалов: нитроэмалей, нитролаков, нитрошпатлевок общего назначения

Заказать



Тип материала


Растворитель 646 (Р-646) представляет собой смесь летучих органических жидкостей: ароматических углеводородов, кетонов, спиртов, эфиров.



Назначение


Растворитель Р-646 предназначен для разбавления нитроцеллюлозных лакокрасочных материалов: нитроэмалей, нитролаков, нитрошпатлевок общего назначения. 



Технические характеристики


Внешний вид и цвет

…………………………………………………………………………………………….. бесцветная или слегка желтоватая однородная прозрачная жидкость без видимых взвешенных частиц


Массовая доля воды по Фишеру, %,

. ……………………………………………………………………………………………. не более 2


Летучесть по этиловому эфиру

…………………………………………………………………………………………….. 8-15


Кислотное число, мг КОН / г,

…………………………………………………………………………………………….. не более 0,06


Число коагуляции, %,

…………………………………………………………………………………………….. не менее 35



Пригодность к разбавлению нитроэмалей


После высыхания не должно наблюдаться побеления пленки, которая должна иметь гладкую поверхность без белесоватых или матовых пятен.

Стандарт 


ГОСТ 18188-72

Характеристики товара

По типу материала

Растворитель / Разбавитель

По области применения

Полуфабрикатные материалы, Химическая промышленность

Купить растворитель 646 (Р-646)

Что такое Растворитель Р646 ГОСТ?


Безопасный для людей и очень необходимый для промышленности – так, пожалуй, коротко, но очень точно можно охарактеризовать растворитель Р-646. Чем же он отличается и наоборот, что общего у него со всеми остальными известными и востребованными растворителями?


В первую очередь следует отметить, что это вещество обладает крайне высокой растворяющей способностью. Данный показатель очень важен для лакокрасочной промышленности, где этот растворитель широко применяется в наше время.


Однако реагент используется не только в процессе производства лаков и эмалей. Он входит еще и в состав грунтовок и шпатлевок. Растворитель
придает этим смесям рабочую консистенцию. Все, наверное, помнят, насколько важно, чтобы грунтовки и шпатлевки хорошо выравнивали поверхности. От этого в дальнейшем зависят и все остальные работы.


Кроме этого, многие производства используют реагент для обезжиривания поверхностей и промывки оборудования для оптимизации технологических процессов. Ведь очень многие из них требуют идеально чистых емкостей.


Еще одной характерной особенностью растворителя Р-646
является запах: он не настолько неприятный и тошнотворный, как у всех остальных растворителей. Очень часто данный факт является решающим в пользу этого растворителя.


Однако не только эта характеристика делает его популярным. Вещество обладает хорошей однородной консистенцией без каких-либо взвесей, расслоения или осадка. Это дает возможность получить ровную и блестящую поверхность без пятен и «кратеров». Реагент выступает в качестве структурообразущим элементом поверхности лаков и красок.


Качественный растворитель Р-646 считается тот, который соответствует всем нормам, которые установлены ГОСТом 18188-72«Растворители марок 645, 646, 647, 648 для лакокрасочных материалов». Что же именно требует данный норматив? В первую очередь внешне это должна быть прозрачная жидкость желтоватого цвета.


Кратко остановимся на составе растворителя Р-646 – это смесь летучих органических жидкостей: сложных эфиров, кетонов, спиртов, ароматических углеводородов. Название данных веществ, вряд ли, о чем-то скажут вам, поэтому не будем уделять этому много внимания.


Хотя вещество и не наносит вреда людям, которые работают с этим растворителем, однако, все-таки, следует придерживаться некоторых норм безопасности при использовании растворителя Р-646. Насколько требовательны они и выполнимы, нам хотелось бы рассказать более подробно.


Оптимально, если место и тара хранения полностью закрыты для проникновения прямых солнечных лучей. В непосредственной близости не должно быть каких-либо нагревательных приборов. Работая с веществом, помещение должно хорошо вентилироваться. Каких-либо особых требований по объему емкостей разлива нет, поэтому это вещество можно купить в удобной компактной или объемной таре. Растворитель можно хранить 12 месяцев от даты его изготовления. Такой срок позволяет предприятиям закупать реагент большими партиями и хранить его в течение года. Поэтому крайне важно, чтобы были соблюдены все нормы его хранения.


Если правильно вести себя с растворителем Р-646, он действительно не нанесет никакого вреда и принесет только желаемый результат. Другими словами при минимуме усилий вы получите ровную и блестящую поверхность либо чистое оборудование для производственных нужд.


У многих возникнет вопрос, что же, все-таки, необходимо делать, если вещество уже попало на кожу или слизистую глаз. В первую очередь, конечно же, никакой паники. Как уже ранее отмечалось, вещество ведет себя достаточно дружелюбно по отношению к человеческому организму. Итак, допустим, что вы не очень аккуратно переливали эти вещество, и произошел контакт с растворителем Р-646. При попадании его на слизистую глаз необходимо промыть это место. Далее следует показаться врачу и убедиться, что с вами все в порядке. Если реагент оказался на коже, нужно тщательно промыть это место теплой водой с мылом. Как видите, все очень просто и безопасно. Надеемся, что смогли вас убедить в этом.  

Мы уверены, что после прочтения этой статьи Вы обязательно захотите купить растворитель Р-646 и можете сделать это у нас прямо сейчас!

Растворитель 646 – технические характеристики, ГОСТ, состав и область применения

Многокомпонентные растворители имеют в своем составе как скрытые компоненты и разбавители, так и главный активный компоненты причем содержание первых, в некоторых случаях может достигать 50%. Использование скрытых растворителей (к примеру спиртов), а также разбавителей снижает общую стоимость растворителя и позволяет использовать как пленкообразующую смесь 2-3 типов полимеров различной природы.

Именно наличие нескольких компонентов растворителей 646 и 647 способствовало получению таких высоких технических характеристик. Эти типы растворителей считаются наиболее популярными, а их область применения с каждым годом стает все больше и больше.

Растворитель 646 технические характеристики, состав, применение.

Растворитель 646 по ГОСТу представляет собой бесцветную или желтоватую жидкость, которая обладает специфическим запахом. Применяют его как в быту, так и в промышленности для обезжиривания и разбавления красок. При помощи растворителя 646 можно довести ЛКМ до требуемой вязкости. Также им хорошо убирать пятна органического происхождения и промывать различные малярные инструменты.

Растворитель 646 очень универсален и эффективен, благодаря своему химическому составу. Это многокомпонентный растворитель, поэтому в его составе присутствует несколько более простых растворителей: 15% этанола, 10% бутанола, 50% толуола, 7% ацетона, 10% бутилацетата и 8% этилцеллозольва.

Хорошую репутацию и огромный спрос, данная марка растворителя заслужила благодаря следующим особенностям:

• Очень широка область применения. Он отлично подходит для разбавления лаков, грунтовок, шпатлевок и эмалей. Его используют в ходе реализации ремонтно-строительных работ зданий и помещений различного назначения, в процессе покраски автомобилей, обезжиривания поверхностей, очистки инструментов.

• Доступность. Его можно с легкостью купить в каждом магазине строительных материалов.

• Легкость в использовании. Не нужно обладать специальными знаниями чтобы использовать растворитель 646. Его сложный состав снижает риск возникновения химических ожогов и жирных следов до минимума.

• Приемлемая цена. Следует знать, что, используя растворитель р 646, технические характеристики его более чем отличные для такой низкой цены.

Как и любое химическое вещество, он имеет и некоторые недостатки: резкий и специфический запах, токсичен, легко воспламеняем.

Растворитель 646 – это соединение нескольких летучих органических веществ, которое обладает следующими физико-химическим свойствами:

• Температура вспышки — 7 °С;

• Температура самовозгорания +4037 °С;

• Температура кипения +59 °С;

• Плотность – 0,87 г/см3;

• Он не набирает вязкости и не замерзает.

Кроме этого, лишним не будет заглянуть в паспорт данного вещества, хотя большая часть цифр ничего не скажут обычному человеку, но технолог производства может запретить и дать рекомендации по использованию на основании данных параметров.

Растворитель марки р6 имеет следующие показатели:

• Кислотное число — 0,06 мг КОН/г;

• Массовая доля – 0,09%;

• Летучесть (по этиловому эфиру) – 12;

• Растворяющее действие – не оставляет белесоватых и матовых пятен;

• Число коагуляции 40 г/о;

• Удельный вес – 0,68 кг/л.

 

Используется растворитель для производства и работ с различными ЛКМ, в том числе и с нитроцеллюлозной группой красок. Р-646 нужен либо для разбавления перед применением, либо в процессе производства. Кроме нитроцеллюлозной группы красок он также используется для разбавления акриловых и меланиноамидных лакокрасочных материалов.

В ходе работ с использованием растворителя 646, обязательно нужно использовать респиратор и надевать резиновые перчатки. Также очень важным моментом является хорошая вентиляция. Не лишними будут специальные защитные очки, поскольку испарение растворителя воздействует не только на дыхательную систему, но и на глаза.

Общее сведения о растворителе 647.

Растворитель 647, также, как и 646, считается одним из самых востребованных. Он производится множеством химических предприятий и отлично известен потребителям. Потребительские свойства высокого уровня обусловили популярность и широту использования данного растворителя.

В состав растворителя 647 входит смесь органических летучих веществ: кетонов, ароматических углеводородов, эфиров и спиртов. Что касается химического состава, и процентного соотношения различных веществ, то 647 растворитель очень похож на 646. В его составе имеет 41,3% толуола, 29,8% бутилацетата, 21,2% этилацетата, 7,7% бутанола. Также он имеет в своем составе такие компоненты как этилцеллозольв и ацетон, и считается более агрессивным веществом чем растворитель 646. Поэтому применение растворителя 646 целесообразно там, где очень важно бережное отношение к обрабатываемой поверхности.

Используется данный тип растворителя для удаления лакокрасочных покрытий и лаков, а также для растворения пленкообразователей на нитроцеллюлозной основе. Его очень часто используют как растворитель для кузовных работ, так как он пригоден для эффективного разбавления нитролаков и нитроэмалей, используемых в ходе покраски автомобиля.

Если вы выбираете растворитель 647, технические характеристики нужно знать обязательно. Рассмотрим самые главные из них. Что касается внешнего вида, то это слегка желтоватая или вовсе бесцветная жидкость без расслаивания, мути и взвешенных частиц. Его массовая доля воды (по Фишеру) составляет 0,6%, летучесть от 8 до 12, число коагуляции 60, а кислотное число 0,06 мг КОН/г.

Растворитель Р-646, его назначение и свойства

В нашей необъятной стране практически каждый, кто имел дело с покрасочными работами, знаком и с растворителем Р-646. Это один из наиболее распространенных и популярных органических растворителей в России. Некогда в советские времена он был создан для разбавлении бытовых нитроэмалей и нитролаков, однако обнаружил в себе большую универсальность и стал использоваться в самых различных областях, где требуется доведение лакокрасочных материалов до нужной консистенции или удаление пятен.

Растворитель Р-646 востребован как в быту, так и в промышленных масштабах, он используется для разбавления лакокрасочных составов и для очищения поверхностей, подвергаемых дальнейшей обработке, например, той же покраске. Растворителем Р-646 промывают и очищают малярные инструменты после работ и им удаляют пятна органической природы.

Универсальность и эффективность этого растворителя достигается за счет особого химического состава, ведь среди компонентов этанол, толуол, бутанол, бутилацетат, этицеллозольв и ацетон. Такое сочетание позволяет эффективно растворять многие вещества органической природы, вот почему растворитель Р-646 стал так популярен. Впрочем, этот растворитель, будучи одним из самых сильных, в некоторых случаях требует аккуратного обращения, например, чтобы не повредить нижний слой краски. В определенных ситуациях использование его не рекомендуется, поскольку оптимальным вариантом могут стать менее «мощные» составы.

Поскольку растворитель Р-646 представляет собой типичный органический растворитель, то летучие органические соединения в его составе могут нести определенную угрозу при неправильном использовании. При работе с этим растворителем следует всегда помнить, что это легковоспламеняющаяся жидкость. Кроме того, при работе в закрытом пространстве следует позаботиться о хорошей вентиляции помещения.

Наша компания реализует химическую продукцию ведущих заводов России и предлагает Вам широкий ассортимент растворителей для различных нужд, а также сжиженные технические газы и другое химическое сырье.

Характеристики и применение растворителя 646


На текущий момент растворитель 646 ГОСТ 18188-72 по праву входит в число наиболее популярных растворяющих веществ российского производства. Его химический состав включает в себя различные летучие органические вещества: толуол, бутилацетат, этилцеллозольв, этанол, бутанол и ацетон. В свою очередь, перед тем, как купить растворитель 646, вы можете опознать его как прозрачную и бесцветную (в отдельных случаях —  слегка желтоватую) жидкость, не разделяющуюся на фракции. Эта жидкость обладает специфическим запахом и не выделяет взвеси.

Использование растворителя 646


Несмотря на свою достаточно невысокую цену, растворитель 646 показывает себя превосходным средством для разведения широкого спектра лакокрасочных материалов:

  • Нитроцеллюлозные
  • Меланиноамидные
  • Эпоксидные
  • Глифталевые
  • Акриловые


Также растворитель 646 ГОСТ 18188-72 используют для очистки инструментов после проведения окрасочных работ. С его помощью обезжиривают и избавляют от пятен органических веществ практически любые поверхности. Процесс разбавления растворителем 646 лакокрасочных материалов достаточно прост: растворитель постепенно вводится в ЛКМ при равномерном перемешивании (важно только соблюсти указанные в инструкции по использованию соотношения растворителя и основного вещества – таким образом можно добиться нужной степени вязкости).

Меры предосторожности при работе


Купив растворитель 646, необходимо максимально строго придерживаться правил его использования, соблюдать все меры предосторожности.

  • Работа должна вестись в помещении с хорошо работающей вентиляцией.
  • Работа без использования защитного снаряжения (резиновые перчатки, маска, защитные очки) недопустима.
  • Не подносите растворитель 646 ГОСТ 18188-72 близко к огню – он является достаточно легко воспламеняемым веществом.
  • Для хранения этого вещества обеспечьте таре, в которой находится растворитель, абсолютную герметичность. Оберегайте его от прямых солнечных лучей и старайтесь держать в комнатной температуре. При таких условиях срок хранения растворителя 646 будет составлять 12 месяцев.

Растворитель Р-646 канистра 10 литров

Растворитель 646 — представляет собой смесь ароматических углеводородов, спиртов, кетонов и эфиров. Растворитель Р-646 применяется для разбавления нитроцеллюлозных, меланиноамидных, глифталевых, эпоксидных, акриловых, лакокрасочных материалов и шпатлевок согласно инструкции по применению разбавляемого ЛКМ. Растворитель Р-646 изготовлен по разной рецептуре: эконом / стандарт / ГОСТ 18188-72.


Основные марки разбавляемых ЛКМ для растворителя р- 646:

Лаки: НЦ-269, НЦ-279, НЦ-292, НЦ-5108, ЭП-524
Эмали: НЦ-132, НЦ-170, НЦ-184, НЦ-216, НЦ-217, НЦ-25, НЦ-246, НЦ-258, НЦ-262, НЦ-271, НЦ-273, НЦ-1104, НЦ-282, НЦ-291, НЦ-299, НЦ-929, НЦ-5100, НЦ-5123, нитроэмали для грузовых автомобилей, нитроэмалиь № 924, ЭП-773, КО-83, НЦ-1124, НЦ-1120
Грунтовки: НЦ-081, МС-067, МЧ-042
Шпаклевки: НЦ-007, НЦ-008, НЦ-009, ЭП-0010, ЭП-0020

Основные характеристики растворителя 646:

Показатель Норма по ГОСТ 18188-72 марка «Р-646»
Цвет: Бесцветная или слегка желтоватая, однородная жидкость.
Массовая доля

воды, % не более

2
Плотность, г/см3, при +20С 0,840-0,860
Летучесть по этиловому эфиру 8-15
Кислотное число, мг КОН/г, не более 0,06
Число коагуляции, % не менее 35
Пригодность к разбавлению нитроэмалей годен
Другие разбавляемые ЛКМ эпоксидные, мочевиноформальдегидные, кремнийорганические
 t вспышки (в закрытом тигле) С:  6
t самовоспламенения С: 428

Изготовитель: ИЗОЛИТ, Ярославская область
Требования безопасности и хранения растворителей:

  1. Растворитель 646  по степени воздействия на организм относится к 4 классу опасности (малоопасный).
  2. Растворитель 646 при высоких концентрациях действует наркотически. При попадании на кожу растворитель вызывает сухость кожи, раздражение а также дерматит и экземы. Растворитель оказывает сильное раздражающее действие на слизистую оболочку глаз и верхние дыхательные пути. При попадании на кожу смыть большим количеством воды с мылом.
  3. Растворитель 646 относится к легковоспламеняющимся продуктам: температура самовоспламенения 428 °С,
  4. Предельно допустимая концентрация паров растворителя 646 в воздухе рабочей зоны составляет 100 мг/м3
  5. При работе с растворителем 646 необходимо применять индивидуальные средства защиты по ГОСТ 12.4.011 и ГОСТ 12.4.068 а также спецодежду по ГОСТ 12.4.103.
  6. Работы с растворителем проводить в резиновых перчатках в хорошо проветриваемом помещении.
  7.  При сливно-наливных операциях следует строго соблюдать правила защиты от статического электричества. Всё оборудование и коммуникации должны быть защищены от статического электричества.
  8. При вскрытии тары запрещается использовать инструмент дающий искру
  9. Запрещается слив и перекачка растворителя 646 сжатым воздухом
  10. Производственные и складские помещения, в которых ведутся работы и хранится растворитель 646 должны быть обеспечены механической приточно-вытяжной вентиляцией, освещение и электрооборудование должно быть во взрывобезопасном исполнении
  11. В помещениях для хранения и применения растворителя 646 запрещается обращение с открытым огнем, курение а также использование инструментов дающих искру (как электро так и ручного) .
  12. При розливе растворителя 646 обезвреживание производить засыпкой песком с выносом его в специально отведенное место.
  13. Для тушения растворителя 646 можно применять: кошму, песок, пенные огнетушители, пенные установки, тонкораспыленную воду, углекислый газ.

Гарантийный срок хранения растворителей: 1 год


Утилизация растворителя: — Утилизируйте пустые банки, бочки, канистры и остатки растворителя 646 в ближайшем местном пункте сбора опасных бытовых отходов. Если не один такой пункт вам не доступен, утилизируйте растворитель 646 в соответствии с федеральными, государственными и местными законами. 

 

Растворитель Colorist Р-646 10л , цена

Растворитель Colorist Р-646 10л
Растворитель Colorist Р-646 представляет собой смесь кетонов, эфиров, спиртов и ароматических углеводородов. Вещество обладает отличной растворяющей способностью и используется для разбавления шпатлевок и различных лакокрасочных материалов. Применение растворителя обеспечивает краскам отличный блеск и повышает их защитные свойства. Материал добавляется в лакокрасочную продукцию небольшими порциями при непрерывном помешивании.
Работы, связанные с производством и …

Читать далее

Вес брутто
10 кг
Марка
?
У каждого лакокрасочного материала (ЛКМ), будь то лак, краска или шпаклевка, есть свое «имя» и обозначение — маркировка. Оно состоит из слов, букв, а также цифр. Обозначение пигментированных ЛКМ состоит из пяти групп знаков, на непигментированных (лаков) – четырех.

Подробнее

Р-646
Огнеопасность
Да
Основа
?

Компонент краски, который «связывает» частицы пигментов, делая пленку однородной и обеспечивает краске способность «прилипать» к поверхности. Природа и количество связующего определяют такие свойства лакокрасочных изделий, как прочность, устойчивость к смыванию, адгезию, цветостойкость и долговечность.

Органическая
Разбавляемые основы
Лаки, Алкидные эмали, Алкидные лаки
Страна производства
Россия

Растворитель высшего качества 646 для высококачественной печати

Магазин надежных растворителей 646 . на Alibaba.com и воспользуйтесь удивительными скидками и ценами. На качество печати влияет несколько факторов. Пожалуй, наиболее важным из них является растворитель 646 . используются, поскольку они влияют на общий цвет, внешний вид и текстуру отпечатка. Эти продукты гарантируют получение четких и потрясающих отпечатков высочайшего качества.

Существует несколько типов растворителя 646 .доступны для покупки на Alibaba.com. Двумя наиболее распространенными являются те, которые используются в лазерных и струйных принтерах. Типы, используемые в лазерных принтерах, дороже, но они более долговечны и дают высококачественные результаты. Они используются для печати фирменных бланков, этикеток, рекламных продуктов и других деловых документов. Пигментированные или окрашенные типы, используемые в струйных принтерах, более доступны и лучше всего работают, когда требуются небольшие объемы печати. Они обеспечивают эффективные и очень четкие отпечатки.Для профессиональных целей также можно использовать высококачественный струйный принтер.

Есть и другие типы, например твердые, которые имеют воскообразную консистенцию. Тип ленты используется в матричных и термотрансферных принтерах. УФ-тип использует УФ-лучи на поверхности для печати, мгновенно высыхает и является одним из самых дорогих. Для 3D-печати используются смолы разных цветов и типов. растворитель 646 . при покупке следует учитывать некоторые факторы, такие как тип используемого принтера и желаемый тип отпечатка.

Выберите один из нескольких растворитель 646 . очки на Alibaba.com по доступным ценам. Эти продукты обеспечивают эффективные результаты и могут быть приобретены в зависимости от ваших предпочтений и целей. Купите один картридж для одиночного случая или приобретите мультиупаковку, чтобы сэкономить время и деньги. Что бы вам ни понадобилось, будь то принтер или картридж к нему, вы обязательно найдете его здесь.

(PDF) 📄 Полное растворение и частичная делигнификация древесины в ионной жидкости Ацетат 1-этил-3-метилимидазолия

Рис. 10 СЭМ-изображения (а) измельченной южной желтой сосны и (б) соответствующего регенерированного богатого целлюлозой материала.

4. Выводы

Как мягкая древесина (южная желтая сосна), так и лиственная древесина (красный

дуб) могут быть полностью растворены в [C2mim] OAc после мягкого измельчения

. В целом, [C2mim] OAc оказался лучшим растворителем

, чем [C4mim] Cl, для растворения древесины. Красный дуб

показал более высокое и быстрое растворение, чем южная желтая сосна.

Меньший размер частиц и соответствующая начальная загрузка древесины также

приводят к улучшенному растворению. Время растворения может быть сокращено на

за счет применения микроволнового импульсного нагрева или ультразвука

в качестве предварительной обработки перед обычным нагревом. Меньшее количество связанных с лигнином-

углеводов предпочтительно растворяется в ИЖ.

Восстановление большей части растворенной древесины из ace-

тон / вода (1: 1 об. / Об.) Дает регенерированный материал, который на

пропорционально богаче углеводов, чем исходная древесина,

и лигнин в свободной форме с структура, аналогичная Индулину АТ.

В качестве примера, при полном растворении 5 частей частиц южной

желтой сосны в 100 частях [C2mim] OAc, примерно

60% исходной холоцеллюлозы было извлечено из материала, богатого целлюлозой-

, тогда как примерно одна треть исходного лигнина

была получена в свободной форме, а другая треть связана с углеводами

как часть обогащенной восстановленной древесины. Таким образом,

частичное разделение компонентов древесины становится возможным

с относительной эффективностью, без использования токсичных химикатов, и с

с незначительным разложением природных полимеров или без него.

Дальнейшие исследования нашей группы будут сосредоточены на том, как

облегчить расщепление ковалентных связей между лигнином и

углеводом, чтобы получить улучшенное или даже полное разделение

составляющих биополимеров. Кроме того, потребуется более глубокое понимание влияния переменных, таких как начальная степень влажности древесины

или долгосрочная деградация IL

.

Благодарности

Работа выполнена при спонсорской поддержке корпорации BASF

.Мы также благодарим Центр материалов по информационным технологиям

(MINT) и Институт

Алабамы за совершенство производства (AIME) Университета

Алабамы за предоставление некоторых аналитических инструментов, использованных

в этом исследовании.

Ссылки

1 C.E. Wyman, B.E.Dale, R. T. Elander, M. Holtzapple, M. R.

Ladisch and Y. Y. Lee, Bioresour. Технол., 2005, 96, 1959–1966.

2 Г. В. Хубер, С. Иборра и А.Corma, Chem. Rev., 2006, 106, 4044–

4098.

3 P. J. Dauenhauer, J. D. Dreyer, N. J. Degenstein and L. D. Schmidt,

Angew. Chem., Int. Изд., 2007, 46, 5864–5867.

4 Т. Р. Карлсон, В. П. Тушар и Х. У. Джордж, ChemSusChem, 2008,

1, 397–400.

5 Г. Геллерстедт, «Химия варки целлюлозы» в химии древесины и целлюлозы,

изд. Д. Н.-С. Хон и Н. Шираиши, Марсель Деккер, Нью-Йорк, 2001,

, с. 859–905.

6 Ф.С. Чакар, А. Дж. Рагаускас, Ind. Crop Prod., 2004, 20, 131–141.

7 C. Bonini, M. D’Auria, L. Emanuele, R. Ferri, R. Pucciariello и

A. R. Sabia, J. Appl. Polym. Наук, 2005, 98, 1451–1456.

8 Й. Ли и С. Сарканен, Макромолекулы, 2005, 38, 2296–2306.

9 Й. Ли и С. Сарканен, Макромолекулы, 2002, 35, 9707–9715.

10 Дж. Ф. Кадла и С. Кубо, Макромолекулы, 2003, 36, 7803–7811.

11 W. Thielemans, E.Can, S.S.MoryeandR.P.Wool, J.Прил. Polym.

Sci., 2002, 83, 323–331.

12 Потребности в фундаментальных исследованиях: катализ для получения энергии, Отчет Министерства энергетики США

, Семинар по фундаментальным энергетическим наукам, Au-

6–8 июля 2007 г. (доступно на http://www.er.doe.gov / bes / reports /

файлов / CAT_rpt.pdf; последний доступ: 8 декабря 2008 г.).

13 М. Э. Химмель, С. Динг, Д. К. Джонсон, В. С. Адни, М. Р. Нимлос,

Дж. У. Брэди и Т. Д. Фуст, Science, 2007, 315, 804–807.

14 с.Э. Лебо младший, Дж. Д. Гаргулак и Т. Дж. МакНалли, «Лигнин» в Энциклопедии химической технологии Кирка

Отмера, изд. JI Kroschwitz,

и M. Howe-Grant, John Wiley & Sons, New York, 2001.

15 E. Sj

ostr¨

om, «Химия варки целлюлозы» в химии древесины: основы

и приложения , изд. E. Sj¨

ostr¨

om, Academic Press, New York, 1981,

pp. 104–145.

16 Р. П. Сватлоски, С.К. Спир, Дж. Д. Холбрей и Р. Д. Роджерс, Дж. Ам.

Chem. Soc., 2002, 124, 4974–4975.

17 Х. Чжан, Дж. Ву, Дж. Чжан и Дж. Хе, Макромолекулы, 2005, 38,

8272–8277.

18 Т. Хайнце, К. Швикал и С. Бартель, Macromol. Biosci., 2005, 5,

520–525.

19 Д. М. Филлипс, Л. Ф. Драмми, Д. Г. Конради, Д. М. Фокс, Р. Р.

Найк, М. О. Стоун, П. К. Трулов, Х. К. Делонганд Р. А. Манц,

J. Am. Chem. Soc., 2004, 126, 14350–14351.

20 Y. Pu, J. Wood Chem. Технол., 2007, 27, 23–33.

21 А. Бисвас, Р. Л. Шогрен, Д. Г. Стивенсон, Дж. Л. Уиллетт и П. К.

Бхоумик, Carbohydr. Полим., 2006, 66, 546–550.

654 | Green Chem., 2009, 11, 646–655 Этот журнал принадлежит Королевскому химическому обществу, 2009 г.

Опубликован 13 марта 2009 г. Загружен Национальной лабораторией Лоуренса Беркли 26.06.2017 17:07:37 .

Синтез органических аэрогелей с настраиваемой морфологией и прочностью путем контролируемого набухания в растворителе в соответствии с растворимостью по Хансену

Для этого исследования органогели формируются с использованием ацетата целлюлозы (CA) в ацетоне с последующей заменой растворителя в смеси ацетона и воды и замораживанием. сушка для получения конечного продукта аэрогеля.Чтобы понять влияние смеси растворителя ацетон-вода на органогель во время замены растворителя, мы сначала опишем, как параметры растворимости Хансена влияют на набухание ацетата целлюлозы. После этого анализа мы обсуждаем влияние набухания / усадки на морфологические и механические свойства полученных аэрогелей, включая анализ образования лиофилизированных аэрогелей посредством однонаправленного замораживания, чтобы изолировать влияние замораживания на механические свойства аэрогеля. .Наконец, мы более подробно остановимся на роли обмена растворителя на свойствах аэрогеля, оценив эффект остановки набухания органогеля в неравновесном состоянии во время замены растворителя.

Параметры растворимости и набухание по Хансену

Параметры растворимости по Хансену служат поддающимся количественной оценке руководством для определения растворимости одного материала в другом. В этом исследовании мы используем метод растворимости Хансена, чтобы понять растворимость ацетата целлюлозы (CA) с содержанием ацетила 39.7% в смесях растворителей ацетон / вода.

Общая концепция параметра растворимости Хансена в терминах сферы растворимости Хансена (рисунок S1) описана во вспомогательной информации. Вкратце, параметр растворимости Хансена учитывает дисперсию ( δ d
), полярный ( δ p
) и водородной связи ( δ h
), которые возникают, соответственно, из ван-дер-ваальсовых, дипольных и водородных взаимодействий.{2}))}, $$

(1)

где Ra — разница между HSP растворителя (1) и полимера (2). Константа 4 является эмпирической корреляцией. Растворимость полимера в растворителе сохраняется, если Ra < R 0 , где R 0 определяется как «радиус взаимодействия» полимера, который измеряется экспериментально 32 . Относительная разница энергии (RED) определяется как Ra / R 0 .Значение RED <1 означает хорошую растворимость полимера в данном растворителе.

Для ацетата целлюлозы в смесях ацетон / вода, значения соответствующих HSP и R 0 полимера показаны в таблице 1. Значения для CA, воды и ацетона определены экспериментально в другом месте 32 .

Таблица 1 Параметры растворимости Хансена (HSP), соответствующие полимеру (ацетат целлюлозы, CA) и растворителям (смеси воды и CA) 32 .AVF — это объемная доля ацетона в воде.

HSP смеси растворителей, состоящей из небольших молекул, таких как ацетон и вода, можно рассчитать с помощью простого правила смешивания. На рис. 1а показан RED как функция объемной доли ацетона (AVF) в смеси растворителей. Из графика видно, что смесь с 0,9 AVF теоретически является лучшим растворителем для CA. Это утверждение подтверждается экспериментально анализом мутности растворов СА (4 и 8 мас.%) В смесях растворителей AVF 1,0.9 и 0,75. Как видно из рис. 1б, раствор СА в 0.9 AVF имеет самую низкую мутность. Соответствующие изображения решений также показаны на рис. 1б.

Рис. 1

( a ) Относительная разница энергии (КРАСНАЯ) между СА и смесью растворителей ацетона и воды. ( b ) Измерение мутности 4 и 8 мас.% Растворов СА в растворителе ацетон / вода. Значение мутности (NTU) для 8 мас.% CA в 0,75 AVF было вне пределов прибора, то есть 10000 NTU.На изображениях показан раствор СА в смесях растворителей с различными АВФ, представленными на изображении. Обратите внимание на резкое увеличение мутности в водосодержащих растворителях при AVF <90%.

Это понимание поведения СА-полимера в смеси растворителей ацетон / вода может быть использовано для настройки характеристик набухания СА-гелей. Анализ показывает, что гель CA должен демонстрировать максимальное набухание в лучшем растворителе (0,9 AVF) из-за релаксации полимерных цепей. Как видно из Таблицы S1, полярный компонент и компонент водородных связей имеют решающее значение при определении взаимодействия между растворителем и СА.В дополнение к минимальному значению полярного компонента (> 5 МПа 1/2 ) компонент водородных связей растворителя должен быть аналогичен компоненту CA. Следовательно, при добавлении 10% воды компонент водородных связей смеси становится подобным компоненту CA, что позволяет 10% смеси (AVF = 0,9) стать «лучшим» растворителем для CA.

CA гель или органогель получали растворением CA в безводном ацетоне вместе с пиромеллитовым диангидридным сшивающим агентом. Реакция сшивания катализируется триэтиламином.Обратите внимание, что набухание гелей также зависит от плотности сшивки. Здесь плотность сшивания поддерживалась постоянной, чтобы изолировать влияние состава растворителя (подробности см. В экспериментальном разделе). Гели CA были нарезаны кубической формы и погружены в смесь ацетона и воды с известной АВФ. Был измерен объемный коэффициент набухания, результаты представлены на рис. 2а. Максимальное набухание, предсказанное для органогеля CA из HSP, составляет 0,9 AVF. Однако набухание имеет максимум при AVF между 0.75 и 0,9. Наблюдаемый диапазон AVF вместо фиксированного значения, как предсказано на основе HSP, скорее всего, связан с химическим сшиванием CA, которое может вызвать небольшой сдвиг в концентрации «хорошего растворителя» для органогелей CA. Как и ожидалось, исходя из параметров растворимости Хансена, смеси растворителей ниже 0,5 AVF являются плохими растворителями для CA и не показывают какого-либо заметного набухания.

Рис. 2

( a ) Набухание сшитых органогелей в зависимости от объемной доли ацетона (AVF) в растворителе.( b ) Равновесный объемный коэффициент набухания после обмена с водой. ( c ) Схематическое изображение набухания поперечно-сшитых гелей CA (цветовой код: черные цепи-полимер CA; красные пунктиры — поперечные связи; синие точки — молекулы воды; серый — ацетон и голубая вода). Гидролиз сложноэфирных связей ожидается, когда органогель вступает в контакт с водой, что приводит к необратимому набуханию геля, называемого здесь «гидрогелем» (от набухшего органогеля до гидрогеля, как показано размером изображения).

Полученные органогели затем погружали в деионизированную воду на 72 часа и дважды заменяли деионизированную воду между ними для удаления избытка ацетона. Полученные гели называют гидрогелями. Интересно, что даже после погружения набухших органогелей в плохой растворитель (воду) они не возвращались в исходное состояние; фактически, они уравновешивались при данном конечном коэффициенте набухания, рис. 2b. Конечный коэффициент набухания составляет от 2,7 до 1,4 для AVF от 0,75 до 1. Органогель в 0,5 AVF не проявляет дальнейшей усадки после погружения в воду.Тот факт, что набухший органогель не вернулся к своему первоначальному объему и не сжался дальше при погружении в плохой растворитель, можно объяснить эластичным поведением сшитых сеток и присутствием гидроксильных групп на основной цепи целлюлозы.

Мы предполагаем, что эластичная сеть ведет себя так, как схематически показано на рис. 2c. Цепи, нарисованные сплошными линиями, обозначают полимер СА, а более светлые красные линии обозначают поперечные связи. (Синие) точки представляют молекулы воды, а серые и синие точки представляют собой ацетон и воду соответственно.Погружение органогеля в хорошую смесь растворителей (0,9 AVF, среднее изображение на рис. 2c) вызывает набухание и позволяет молекулам воды просачиваться в сетку вместе с ацетоном. Эти молекулы воды могут гидролизовать некоторые сложноэфирные связи, тем самым снижая эластичность сшитой сетки 39 . После погружения набухших органогелей в плохой растворитель (AVF = 0, правое изображение на рис. 2c) на определенный период, молекулы ацетона диффундируют наружу, в то время как молекулы воды остаются захваченными внутри из-за взаимодействий водородных связей с гидроксильными группами полимера CA цепи.

Гидролиз сложноэфирных связей должен вызывать ослабление эластичной сетки, что может качественно коррелировать с понижением модуля упругости (G ’) получаемого гидрогеля. Для проверки этой гипотезы были приготовлены три образца гидрогеля путем погружения органогеля на 4, 12 и 24 часа в растворитель с AVF = 0,9 с последующим погружением в воду на 72 часа и реологическим тестированием. Реологические тесты включали выполнение частотной развертки (1–100 рад / с) на полученных гидрогелях с использованием геометрии зубчатой ​​плоской пластины.Этот тест обеспечивает значения G ’, которые являются мерой модуля упругости гидрогеля. Если гидролиз происходит по сложноэфирным связям, то прогнозируется, что органогель, погруженный на более длительный период (24 ч), будет иметь самый низкий модуль упругости (G ’). Результат, показанный на рисунке S2, указывает на трехкратное уменьшение G ’при увеличении времени погружения геля с 4 до 24 часов, тем самым подтверждая нашу предпосылку.

Следует отметить, что даже несмотря на то, что ацетат целлюлозы был выбран в качестве модельного полимера, иллюстрированная концепция контроля набухания полимера с помощью анализа параметров растворимости Хэнсона может быть легко распространена на другие полимеры.После определения радиуса взаимодействия R 0 полимера подходящие растворители или смеси растворителей могут быть выбраны на основе их параметра растворимости (δ d , δ p , δ H ), которые либо набухают, либо сжимают гель относительно их положения на сфере Хансена. Например, Diehn et al . 40 , использовали подход HSP для предсказания a priori , самосборки 1, 3, 2, 4-дибензилиденсорбита в присутствии различных растворителей с разными HSP и их расстояния от R 0 .

Синтез и свойства аэрогелей

Для наших исследований мы используем номенклатуру для идентификации аэрогелей, полученных в различных условиях обмена растворителей. Например, аэрогель, полученный из геля с заменой растворителя при AVF = 0,9, обозначается как «0 ,9 A ». В общем, можно ожидать, что механические свойства таких аэрогелей зависят от структуры пор, которая включает объем и расположение пор, а также собственную толщину стенок. Было показано, что условия замораживания сильно влияют на структуру пор получаемого аэрогеля 41,42 .Поэтому, чтобы изолировать влияние условий замораживания на механические свойства аэрогелей, было выполнено однонаправленное замораживание, чтобы обеспечить равномерное выравнивание пор и структуру. Процедура и установка показаны на рис. 3а, б. Гидрогель помещали на медную пластину, которая поддерживалась при постоянной температуре -80 ° C. Другие поверхности гидрогеля оставались открытыми для атмосферы при 25 ° C. Замороженный гидрогель сушили вымораживанием при -56 ° C и 0,113 мбар, чтобы получить аэрогель, как показано на вставке к рис.3b. Вид вне плоскости (поперечное сечение, перпендикулярное направлению замерзания) и вид в плоскости (поперечное сечение вдоль направления замерзания) СЭМ-микрофотографий CA аэрогелей представлены на рис. 3c, d, соответственно. На виде сверху CA аэрогель (рис. 3c) видна сотовая структура с размером ячеек от 50 до 100 мкм. Структура закрытых пор напоминает морфологию сублимированных кристаллов льда. Поскольку скорость роста кристаллов льда сильно анизотропна в одном направлении, полимер СА вынужден выстраиваться вдоль фронта затвердевания.Полимер СА становится концентрированным и сдавливается на границах кристаллов, давая показанную высокоупорядоченную сотовую структуру. На вставке к рис. 3c показано увеличенное изображение, полученное с помощью SEM, вне плоскости. Вид в плоскости, рис. 3d, показывает направленность пор. Большая часть СА-полимера была выровнена в направлении роста кристаллов льда, и на этом изображении не наблюдалось никакой сотовой структуры. Подобное выравнивание пор с сотовой структурой наблюдалось при направленном замораживании пен целлюлозных нановискеров 43 и композитной пены на основе наноцеллюлозы и оксида графена 44 .Однако структура пор не ограничивается столбчатой ​​геометрией. Чау и др. . 45 , например, продемонстрировал фибриллярную и пластинчатую морфологию в дополнение к сотовоподобным столбчатым системам во время направленного замораживания сшитых гидразоном аэрогелей CNC / POEGMA.

Рисунок 3

( a ) Иллюстрация однонаправленного замораживания гидрогеля. ( b ) Изображение, показывающее схему однонаправленной заморозки. На вставке показано изображение СА аэрогеля ( c ), полученное с помощью SEM, на виде вне плоскости (поперечное сечение, перпендикулярное направлению замерзания).На вставке показано увеличенное СЭМ-изображение (масштаб: 100 мкм) и ( d ) СЭМ-изображение вида в плоскости (поперечное сечение в направлении к направлению замораживания).

Следует отметить, что погружение геля СА в воду (т.е. плохой растворитель согласно HSP) может вызвать разделение фаз, что приведет к иерархической пористости с размером пор <1 мкм. Однако результаты показывают только крупные поры размером 50–100 мкм, образованные между непористыми стенками. Мы полагаем, что структуры CA с разделенными фазами, если таковые имеются, были устранены на стадии замораживания, возможно, за счет сжатия в тонкие стенки полимера во время медленного замораживания воды.Чтобы подтвердить эту идею, мы выполнили крио-СЭМ гидрогеля, приготовленного из замены растворителя в AVF = 0,9. Во время подготовки образца для крио-SEM гидрогель быстро замораживали в жидком азоте, чтобы предотвратить разрушение образца из-за объемного расширения льда. После этого следовала сублимация льда, покрытие золотом и визуализация образца. Полученное SEM-изображение, показанное на рис. S3a, b, демонстрирует расположение CA в сотах, как это наблюдалось ранее. Увеличение небольшого участка рисунка S3b, где разрушение образца было предотвращено за счет быстрого замораживания, указывает на структуру полимера CA с разделенными фазами (рисунок S3c), как и предполагалось.Однако на конечные свойства высушенных аэрогелей в основном влияют их объемные свойства, которые определяются макропористой структурой, полученной при однонаправленном замораживании гидрогеля.

Аэрогели СА, полученные обменом растворителей и сублимационной сушкой, были проанализированы на предмет их структурных и механических свойств. Как видно из рис. 4а, аэрогели 0,9 A и 0,75 A имеют минимальную плотность и наибольший объем пор. Гидрогель с 4 мас.% СА подвергается минимальной усадке во время сублимационной сушки.Следовательно, разница в плотности и пористости объясняется набуханием органогелей CA при погружении в растворители с различными AVF. Органогели, погруженные в 0,9 и 0,75 AVF, показали максимальное набухание, что привело к образованию аэрогелей с наименьшей плотностью и наибольшим объемом пор. Органогель, погруженный в 0,5 AVF (плохой растворитель для CA), не проявлял набухания, что приводило к агрегации полимерных цепей даже до замораживания, таким образом давая аэрогель с самой высокой плотностью и самым низким объемом пор.На рисунке S4 показаны SEM-изображения аэрогелей 1A-0.5 A . Аэрогели 1 A, 0,9 A и 0,75 A демонстрируют сотовый рисунок, охватывающий весь аэрогель. С другой стороны, аэрогель 0,5 A показывает поры, которые не охватывают весь аэрогель.

Рисунок 4

( a ) Плотность и объем пор (%) СА-аэрогелей, синтезированных из гидрогелей, которые были получены после замены растворителя с различными объемными долями ацетона (AVF).( b ) Кривая деформации сжатия для аэрогелей СА. На вставке показано направление сжатия (внеплоскостное сжатие). (c ) СЭМ-изображения стенки пор аэрогелей. Толщина стенок аэрогелей соответствует 1,3 ± 0,3 мкм ( 1 A ), 0,8 ± 0,1 мкм ( 0,9 A ), 0,8 ± 0,1 мкм ( 0,75 A ) и 40 ± 12 мкм ( 0,5 A ).

Механические свойства аэрогеля были проанализированы путем измерения напряжения как функции деформации сжатия.На рис. 4b показана кривая растяжения при сжатии для аэрогелей CA, а на вставке показана экспериментальная схема. Эти кривые напоминают кривые сжатия эластомерных пен, представленные Гибсоном и Эшби 46 . Эластомерные пены характеризуются линейной эластичной областью, за которой следует область плато и область окончательного уплотнения. Линейная упругая область контролируется изгибом клеточной стенки. Для CA-аэрогелей наблюдается небольшая линейно-упругая область (деформация менее 3%), что связано с низкой относительной плотностью аэрогелей (<0.09). Аэрогели 1 A, 0,9 A и 0,75 A имеют чрезвычайно низкую относительную плотность (0,03–0,02), что указывает на наличие тонких стенок и краев ячеек, как видно на рис. 4в. Толщина клеточной стенки аэрогелей 1 A, 0,9 A и 0,75 A соответствует 1,3 ± 0,3, 0,8 ± 0,1 и 0,8 ± 0,1 мкм соответственно. Кроме того, сотовый рисунок тонких стенок ячеек (рис. S4) создает большой объем пор и обеспечивает дополнительную прочность аэрогелю.

За линейной эластичной областью следует расширенная область плато (для аэрогелей 1 A, 0,9 A и 0,75 A , деформация до 70%), что связано с коллапсом клеток. стены за счет упругого коробления. Расположение тонких стенок ячеек в виде сот придает структуре аэрогеля отличную несущую способность и позволяет сжимать аэрогели 1A-0,75 A до больших деформаций, превышающих 80%.Циклическое сжатие и высвобождение аэрогелей 0,9 A при увеличении деформации показано на рисунке S5. Это указывает на то, что аэрогель 0,9 A сохраняет свою механическую целостность до 50% деформации, но остаточная деформация достигается при 80% деформации. Кроме того, тот же аэрогель 0,9 A после того, как он подвергся 80% циклам сжатия, продемонстрировал превосходную эластичность при многократном сжатии вне плоскости (фильм S1).Скорее всего, это связано с тем, что структура достигла состояния равновесия после первоначального схлопывания и постоянного изгиба некоторых клеточных стенок. Аэрогель 0,5 A , напротив, имеет высокую относительную плотность (0,09), соответствующую наблюдаемым толстым стенкам и краям клеток (40 ± 12 мкм). Кроме того, сотовая структура аэрогеля 0,5 A не охватывала всю систему (рис. S4), что порождает структурные дефекты, проявляющиеся в виде перегибов на кривой напряжения-деформации.

Когда клетки полностью разрушены, дальнейшее напряжение заставляет стенки клеток соприкасаться друг с другом, что приводит к внезапному росту напряжения. Эта область уплотнения очень отличается для аэрогеля 1A-0,75 A из-за большого объема пор. Напротив, аэрогель 0,5 A имеет короткую область плато, которая быстро переходит в область уплотнения, что объясняется его низким объемом пор.

Как правило, механические свойства аэрогеля, такие как модуль сжатия, энергия поглощения, прочность на сжатие и деформация уплотнения, сильно зависят от его относительной плотности 46 .Обычно плотность аэрогеля регулируется изменением содержания полимера. Однако уменьшение содержания полимера ухудшает механические характеристики аэрогелей. Важно отметить, что в этом исследовании плотность регулировалась путем контроля набухания предшественника органогеля СА.

Используя разработанный здесь подход с контролируемым набуханием, мы обнаружили, что плотность и желаемые механические свойства аэрогелей должны быть адаптированы на основе базового понимания явления набухания. Более того, мы обнаружили, что механическая целостность аэрогелей может быть сохранена.Как видно из таблицы 2, полученные аэрогели показывают широкий диапазон значений жесткости аэрогеля (модуль сжатия от 14 до 340 кПа), ударной вязкости (энергия поглощения от 4 до 103 кПа) и прочности (прочность на сжатие от 22 до 373 кПа). ). Также наблюдался широкий диапазон деформации уплотнения (от 35 до 87%). Деформация уплотнения указывает на сжимаемость аэрогеля, которая возникает из-за большого объема пор и упругих стенок пор, расположенных в наблюдаемой структуре сот.Значения предполагают гибкость предложенного подхода с заменой растворителя, используемого для синтеза аэрогелей с рядом всесторонних механических свойств без каких-либо химических или физических модификаций.

Таблица 2 Механические свойства СА-аэрогелей.

Введение в анизотропию

Выравнивание пор аэрогелей из-за однонаправленного замораживания обеспечивает анизотропное поведение. На рисунке 5 сравнивается сжимающая кривая и деформация аэрогеля 0.9 A в двух основных плоскостях, а именно вне плоскости и в плоскости. Сжатие в плоскости, которое происходит в направлении оси поры, демонстрирует очень отчетливый упругий режим, за которым следует плато и режим уплотнения. Аэрогель демонстрирует податливость (при деформации около 15%), которая характерна для пенопласта 46 . Подобное поведение наблюдали Дониус и др. . 47 для анизотропных аэрогелей наноцеллюлоза-монтмориллонит. При сжатии вдоль оси стенки пор упруго изгибаются до 15% деформации и сжимаются при дальнейшем деформации, что приводит к податливости и постоянному напряжению около 20 кПа.На вставке к рис. 6 показан вид из плоскости снимков СЭМ несжатого и сжатого (вне плоскости, в плоскости) 0,9 Образец аэрогеля показан на вставке к рис. 6. Образцы были сжаты до 85 % напряжение. Сжатое вне плоскости изображение в основном показывает изгиб стенок пор на шарнирах. Есть несколько стенок пор, которые растрескиваются под действием напряжения. Напротив, сжатие в плоскости показывает полное структурное разрушение с потерей морфологии пор. Как видно из вставленных изображений, сжатие вне плоскости позволяет аэрогелю отскакивать назад, тогда как сжатие в плоскости вызывает структурный отказ при сжатии до 85%.Упругое поведение аэрогелей при сжатии вне плоскости также можно увидеть в видеоролике S1 и на рисунке S5. Модуль сжатия для сжатия в плоскости составляет 112 кПа по сравнению с 14 кПа для сжатия вне плоскости. Энергия поглощения составляет 14 кПа, в то время как прочность на сжатие составляет 35 кПа для сжатия в плоскости, по сравнению с 4 и 22 кПа, когда тот же аэрогель сжимается вне плоскости. Деформация уплотнения составляет 74% для сжатия в плоскости и 86% для сжатия вне плоскости. Данные указывают на сильно анизотропное поведение этих аэрогелей, которые могут вести себя как эластичный или пенопласт в зависимости от направления измерения свойств.

Рисунок 5

Кривые зависимости напряжения сжатия от деформации для аэрогеля 0,9 A при сжатии в плоскости и вне плоскости. На вставке показаны снятые с плоскости SEM микрофотографии аэрогеля 0,9 A в несжатом виде (вверху слева), сжатии вне плоскости (внизу слева) и сжатии в плоскости (вверху справа). Также показаны фотографии образцов аэрогелей.

Рисунок 6

( a ) Кинетика коэффициента объемного набухания для органогеля, погруженного в 0.9 АВФ. На вставке коэффициент набухания нормализован, максимальное набухание наблюдается через 48 часов. ( b ) Коэффициент набухания, измеренный после погружения в воду на 72 часа. ( c ) Плотность и объем пор аэрогелей, синтезированных после варьирования времени замены растворителя. ( d ) Кривые зависимости напряжения сжатия от деформации для аэрогелей, полученных после изменения времени замены растворителя.

Остановка гелей в неравновесном состоянии

Основываясь на понимании того, что характеристики набухания геля влияют на морфологию и механические свойства получаемого аэрогеля, мы предположили, что кинетика набухания геля влияет на его свойства.Поэтому мы анализируем кинетику набухания геля и то, как набухание соотносится со свойствами соответствующих аэрогелей. На рис. 6а показана кинетика набухания органогеля в течение 48 ч при погружении в 0,9 AVF. Органогель достиг максимальной степени набухания около 6. Значения на вставке фиг. 6а нормализованы с коэффициентом набухания через 48 часов, что указывает на то, что набухание достигло равновесного значения через 24 часа. Это также означает, что каких-либо заметных изменений свойств аэрогеля после 24 часов набухания не ожидается.Усадка наблюдалась, когда набухшие гели были погружены в чистую воду, которая уравновешивалась при объемном коэффициенте набухания около 1,5–2,3 (рис. 6b). Плотность и объем пор аэрогелей, синтезированных из этих гидрогелей, показаны на рис. 6в. Плотность уменьшается по мере увеличения времени обмена растворителя для органогеля и, следовательно, объем пор аэрогеля увеличивается. Это объясняется набуханием органогеля, которое со временем увеличивается.

Кривые напряжения сжатия и деформации , полученные в результате сжатия аэрогелей вне плоскости, показаны на рис.6г. Аналогичные кривые наблюдались на рис. 4b с короткой линейной упругой областью и длинной областью плато, за которой следует область уплотнения. Примечательно, что кривые растяжения для аэрогелей, полученных после 24 ч замены растворителя, существенно не изменились. Скорее всего, это связано с чрезвычайно низкой относительной плотностью (~ 0,02) и большим объемом пор (98%), наблюдаемыми для аэрогелей, полученных после 24 ч набухания. Набухание достигает равновесия в течение 24 часов, и, следовательно, соответствующие аэрогели после 24 и 48 часов набухания имеют самый высокий объем пор и самую низкую относительную плотность, достижимую с помощью подхода с заменой растворителя для этой концентрации полимера.СЭМ-микрофотографии вида аэрогелей вне плоскости, полученные после изменения времени замены растворителя, показаны на рисунке S6. Все образцы показывают сотовый рисунок.

Результирующие механические свойства аэрогелей, полученных при различных условиях набухания, перечислены в таблице 3. Из значений в таблице очевидно, что свойства аэрогелей можно легко адаптировать, варьируя время замены растворителя. Модуль сжатия составляет 13–160 кПа, энергия поглощения — 4–35 кПа, а прочность на сжатие — 22–151 кПа.Также наблюдается широкая деформация уплотнения от 65 до 88%. Такой широкий диапазон значений открывает возможность достижения заданных механических свойств аэрогеля (жесткости, ударной вязкости и прочности) с помощью предлагаемого подхода с заменой растворителя.

Таблица 3 Свойства аэрогелей, полученных после замены растворителя в течение заданных периодов времени.

Мы предполагаем, что подход, описанный в этом исследовании, может быть распространен на другие полимеры или даже неорганические аэрогели при условии, что подходящий растворитель будет идентифицирован на основе параметров растворимости Хансена.Хотя данное исследование сосредоточено на лиофилизированных аэрогелях, можно ожидать, что эта концепция будет в равной степени применима и для сверхкритических высушенных аэрогелей после определения взаимодействия полимера или неорганического соединения со сверхкритическим CO 2 на основе HSP сверхкритических флюидов 48 .

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.
    Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
    браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.
    Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Ингибирование ацетил-КоА-карбоксилазы подавляет синтез жирных кислот и рост опухоли немелкоклеточного рака легкого в доклинических моделях

Активность ACC1 поддерживает рост и жизнеспособность клеток NSCLC

Несмотря на различную субклеточную локализацию и тканеспецифическую экспрессию ACC1 и ACC2 , несколько исследований предполагают значительную избыточность между каждой изоформой 14,20,21 .Во-первых, чтобы изучить относительную экспрессию ACC1 и ACC2 в NSCLC, мы проанализировали уровни экспрессии их мРНК в восьми клеточных линиях NSCLC человека (A549, h257, h2355, A427, h33, h560, h458 и h2299) с помощью секвенирования РНК (RNAseq). ACC1 был высоко экспрессирован во всех восьми клеточных линиях NSCLC и был экспрессирован на значительно более высоком уровне, чем ACC2 , уровень экспрессии которого варьировался от низкого до неопределяемого ().

Ацетил-КоА-карбоксилаза 1 (ACC1) необходима для FASyn для поддержки жизнеспособности клеток немелкоклеточного рака легкого in vitro и in vivo

( a ) Экспрессия мРНК ACC1 и ACC2 в восьми клеточных линиях НМРЛ человека.

( b ) CRISPR / Cas9-делеция ACC1 в клетках A549 и h257 NSCLC. Вестерн-блот показывает обнаружение АСС в одном из трех отдельных экспериментов.

( c ) Пальмитатный (слева), стеаратный (средний) или олеатный (справа) синтез в [U- 13 C 6 ] меченных глюкозой клонах A549 (вверху) или клонах h257 (внизу).

( d ) Клеточный рост клонов A549 и h257 WT и ACC1 -KO в среде, содержащей обычный FBS ± 200 мкМ экзогенного пальмитата (PA).

( e ) Жизнеспособность клонов WT и ACC1 -KO (A549: вверху, h257: внизу) через 7 дней.

( f ) Расщепленная экспрессия PARP и CHOP в клонах WT и ACC1 -KO через 5 дней роста.

( г ) Биолюминесцентное наложение изображений подкожного роста клонов WT и ACC1 -KO у мышей nude (n = 5 на клон). Изображения на 42-й день, нормализованные к 0-му дню. Масштабная полоса = 1 см

( ч ) Рост опухоли клонов WT и ACC1 -KO, представленный как логарифмическое кратное изменение потока фотонов во время каждой временной точки изображения относительно дня 0 (n = 10 опухолей на клон).

( i ) Средний вес всех опухолей из клонов A549 (слева) и h257 (справа). Число на графике представляет собой общее количество опухолей по генотипу. Изображения-вставки представляют рассеченные опухоли. Масштабная линейка = 1 см.

Для ( c – e ) были зарегистрированы значения в трех экземплярах, и показаны данные одного из минимум двух отдельных экспериментов. Все значения выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение. * P <0,05 ** P <0,01 *** P <0,001 **** P <0,0001 относительно WT ( c , e , h i слева) или относительно ACC1 -KO ( d , h i -right) определено ANOVA ( d , e , h ) с помощью метода Тьюки для множественного сравнения или двустороннего t-критерия Стьюдента ( c , и ).

Чтобы исследовать функцию ACC1 в клетках NSCLC, мы выполнили CRISPR / Cas9 делецию ACC1 в клетках A549 и h257 (и дополнительный рисунок 1 a ) и проверили клоны из каждой клеточной линии на предмет делеции ACC1 методом иммуноблоттинга. Мы использовали антитело, которое распознает как ACC1, так и ACC2, что продемонстрировано иммуноблоттингом в клетках HEK293T, временно экспрессирующих каждую индивидуальную изоформу (дополнительная фигура 1 b ). Однако делеция ACC1 в клетках A549 и h257 привела к полной потере детекции ACC с использованием этого антитела, что дополнительно указывает на низкую экспрессию белка ACC2 в этих клетках ().Мы выделили два клона ACC1 -нокаут ( ACC1 -KO) из клеток A549 и h257, которые показали полную потерю экспрессии белка ACC1, и использовали два клона, которые прошли отбор для трансфекции направляющей РНК (gRNA) и экспрессии Cas9, но не имели делеции. из ACC1 , и, следовательно, они экспрессировали ACC1 дикого типа (WT) (). Мы секвенировали ACC2 в -нулевых клонах ACC1 , чтобы подтвердить специфичность гРНК, и обнаружили, что каждый -нулевой клон ACC1 сохранял аллели дикого типа ACC2 .Стабильная экспрессия полноразмерной кДНК ACC1 человека дикого типа в клоне с нокаутом ACC1 ( ACC1 -KO # 1 + ACC1 ) привела к таким же уровням экспрессии ACC1, что и эндогенный белок ACC1 ().

Рост и выживаемость клонов ACC1-KO были возможны только при экзогенном добавлении пальмитата жирной кислоты в среду, что позволяет предположить, что FASyn был нарушен после делеции ACC1 . Поэтому мы создали клоны, которые были выращены в присутствии экзогенного пальмитата.Чтобы оценить влияние делеции ACC1 на FASyn, мы выполнили метаболическое мечение в клонах A549 и h257 с [U- 13 C 6 ] глюкозой в течение 24 часов для измерения включения углерода во вновь синтезированные жирные кислоты (ЖК). ACC1 делеция привела к полной потере FASyn в клетках A549 и h257, и мы не обнаружили никаких вновь синтезированных пальмитат, стеарат или олеат в клонах с нулевым ACC1; стабильная экспрессия ACC1 приводила к восстановлению FASyn (). Следовательно, активность ACC1 необходима для FASyn в этих клетках NSCLC, и эндогенный ACC2 неспособен компенсировать потерю ACC1 в этих клетках.Однако мы обнаружили, что избыточная экспрессия ACC2 в клетках 293T ACC1 -KO привела к восстановлению FASyn, аналогичному тому, что наблюдается при сверхэкспрессии ACC1, предполагая, что уровни экспрессии ACC2 могут диктовать способность ACC2 компенсировать потерю ACC1 (дополнительный рис. 1 с ).

Для количественной оценки влияния делеции ACC1 на пролиферацию мы проанализировали клеточный рост клонов WT и ACC1 -KO A549 и h257, которые были выращены в пальмитате и затем помещены в среду, содержащую либо обычную фетальную сыворотку теленка (FBS), либо делипидированные FBS. в присутствии или отсутствии экзогенного пальмитата. ACC1 делеция привела к значительному снижению клеточного роста по сравнению с контролем WT в среде, содержащей обычный FBS, что было еще более выражено в делипидированной FBS, но полностью устранялось добавлением экзогенного пальмитата или стабильной экспрессией ACC1 (, дополнительный рисунок 1 d ) . Мы создали два клона ACC2 -KO A549, идентифицированных геномным секвенированием ДНК ACC2 , и обнаружили, что делеция ACC2 не влияет на пролиферацию клеток (дополнительный рис.1 и ). Мы также провели аналогичные исследования CRISPR / Cas9 на мышах Kras G12D / +, p53 — / — NSCLC клеточной линии (634T) 22 и обнаружили, что делеция Acc1 привела к дефекту пролиферации и что Acc2 делеция не оказала никакого влияния (дополнительная фиг.1 f, g, h ).

Жизнеспособность клеток значительно снизилась после делеции ACC1 в клонах A549 и h257 (), и мы обнаружили, что клонов ACC1 -KO имели повышенные уровни расщепленной каспазой поли (АДФ-рибозы) полимеразы 1 (PARP1) в отсутствие пальмитата ().Кроме того, клоны ACC1 -KO экспрессировали повышенные уровни C / EBP-гомологичного белка (CHOP), фактора транскрипции, который регулирует ответ развернутого белка (UPR) и экспрессию проапоптотических генов в ответ на стресс ER 23 , в соответствии с предыдущими наблюдениями с ингибированием FASN в раковых клетках 24 . Индукция расщепленного PARP1 и экспрессия CHOP в клетках ACC1 -KO была устранена добавлением экзогенного пальмитата или стабильной экспрессией кДНК ACC1 ().

Наконец, чтобы определить влияние генетической делеции ACC1 на рост опухоли, мы ввели подкожно два миллиона опухолевых клеток WT и ACC1 -KO в задние бока голых мышей и выполнили биолюминесцентную визуализацию (BLI) в течение 42 дней (A549 ) или 49 дней (h257) (). Клоны WT продемонстрировали 65-90-кратное увеличение биолюминесценции в течение этого периода по сравнению с клонами ACC1 -KO, которые либо оставались статичными, либо имели снижение биолюминесценции, что указывает на снижение жизнеспособности с течением времени ().Клоны WT развивали более крупные и васкуляризованные опухоли по сравнению с клонами ACC1 -KO и имели значительно увеличенный вес опухоли (). Важно отметить, что стабильное восстановление ACC1 спасало рост опухолей h257 ACC1 -KO (). Взятые вместе, эти данные демонстрируют потребность в активности ACC1 для стимулирования FASyn, которая необходима для роста и выживания NSCLC in vitro и in vivo .

ND-646, аллостерический ингибитор ацетил-CoA-карбоксилазы

Недавно мы описали разработку серии аллостерических ингибиторов ACC, примером которой является высокоселективное для печени соединение ND-630, которое было разработано для лечения ожирения печени. заболевания, в том числе неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) 19 .Чтобы определить, является ли фармакологическое ингибирование ACC терапевтическим для NSCLC, мы выбрали ND-646 из этой серии из-за его широкого тканевого распределения. ND-646 (), взаимодействует с несколькими остатками в пределах сайта димеризации биотинкарбоксилазы (BC) домена ACC 19 , включая Arg172 в ACC1 и Arg277 в ACC2, которые являются теми же остатками, с которыми AMPK-фосфорилированный серин ACC пептиды взаимодействуют 25 (). ND-646 ингибирует как ACC1, так и ACC2 и, следовательно, препятствует способности ACC2 компенсировать ингибирование ACC1.Аналогично Soraphen A 26,27 и ND-630 19 , связывание ND-646 с доменом BC ACC нарушает димеризацию фермента и ингибирует ферментативную активность. ND-646 ингибировал димеризацию рекомбинантного BC домена ACC2 человека (hACC2-BC) в нативных условиях; hACC2-BC мигрирует в виде димера в его отсутствие и мономера в его присутствии (дополнительный рис. 2 a ). В бесклеточных системах ND-646 ингибировал ферментативную активность рекомбинантного человеческого ACC1 (hACC1) с IC 50 , равным 3.5 нМ и рекомбинантный АСС2 человека (hACC2) с IC 50 4,1 нМ (дополнительная фигура 2 b , c ). Фармакокинетический анализ ND-646 у самцов мышей CD1, штамма, обычно используемого для доклинической разработки лекарств, продемонстрировал благоприятный лекарственный профиль ND-646 (дополнительный рисунок 2 d ). Для всех последующих анализов мы также использовали ND-608, менее активный энантиомер близкого аналога ND-646 (hACC1 IC 50 = 4790 нМ; hACC2 IC 50 = 6540 нМ) в качестве отрицательного контроля.

Свойства ND-646, низкомолекулярного аллостерического ингибитора АСС. Сайты фосфорилирования AMPK можно использовать в качестве биомаркера для мониторинга взаимодействия ACC с помощью ND-646

( a ). Химическая структура ND-646.

(b ) Модель ND-646, связанного с доменом BC человеческого ACC1. Изображение изображает состыкованную позу ND-646 и ACC1, полученных из сокристаллических структур ND-646 в комплексе с huACC2.

( c ) Обнаружение P-ACC в клетках A549, обработанных в течение 24 часов 5000 нМ ND-608 или доза-ответ ND-646.

( d ) обнаружение P-ACC в печени мышей FVB / n и ( f ) Kras G12D / + ; p53 — / опухоли легких у мышей, получавших перорально однократной дозой носителя или 50 мг / кг ND-646 в течение 3 часов. Числа представляют собой отдельные образцы от отдельных мышей (n = 5 на обработку).

( f ) Обнаружение P-ACC в клетках A549, совместно обработанных либо 500 нМ ND-608, либо ND-646 ± Каликулин A (Cal-A) в течение 1 часа.

( г ) Обнаружение P-ACC в клетках ACC1 -KO HEK293, временно экспрессирующих Mock, ACC1 дикого типа или мутант, связывающий фосфопептид ACC1 (ACC1 R172A ).Клетки обрабатывали 500 нМ ND-646 ± Cal-A.

( h ) Модель, описывающая механизм ингибирования ACC ND-646 и биомаркером P-ACC. Идентичные эффекты возникают в ACC2-BC на консервативных остатках.

Для ( c g ) данные являются репрезентативными из одного из как минимум двух отдельных экспериментов.

Сайты фосфорилирования AMPK в ACC — биомаркер для ND-646

ND-646 взаимодействует внутри сайта димеризации BC домена ACC, специфически связываясь с Arg172 в человеческом ACC1 (hACC1 R172 ) и Arg277 в человеческом ACC2 ( hACC2 R277 ) (), который представляет собой тот же остаток, что и консервативные AMPK-фосфорилированные серины (p-Ser) в ACC1 и ACC2 связываются для ингибирования активности ACC 25,28 .Фосфорилирование этих серинов AMPK в хвосте A-домена ACC1 и ACC2 вызывает конформационное изменение хвоста, способствующее связыванию P-Ser с Arg, что ингибирует димеризацию домена BC и ферментативную активность ACC 25 , аналогично эффектам ND-646, предполагая, что ND-646 и AMPK ингибируют АЦЦ с помощью одного и того же механизма. Поскольку ND-646 и P-Ser связываются с одним и тем же Arg, а ND-646 имеет более высокое сродство к связыванию, ND-646 должен предотвращать связывание P-Ser с этим Arg. Используя фосфопептид-специфическое антитело, которое распознает вышеупомянутые консервативные сайты фосфорилирования AMPK в мышиных и человеческих ACC1 и ACC2, в данном документе совместно именуемые «P-ACC», мы обнаружили, что обработка ND-646 клеток A549 ингибировала нашу способность обнаруживать P-ACC. на этих сайтах фосфорилирования AMPK ().Обработка ND-646 привела к полной потере обнаружения P-ACC в клетках A549 без влияния на общие уровни белка ACC через 24 часа. Эти результаты также были повторены in vivo в печени и автохтонных (Kras G12D / +; p53 — / — ) опухолях легких мышей, получавших перорально однократной дозой 50 мг / кг ND-646 (). Чтобы объяснить, как ND-646 ингибирует обнаружение P-ACC, мы проверили несколько гипотез. ND-646 не препятствовал способности AMPK фосфорилировать Ser 222 в хвосте A-домена рекомбинантного hACC2-BC, несмотря на ингибирование димеризации домена BC (дополнительный рис.2д). Кроме того, ND-646 не влиял на способность AMPK фосфорилировать другие прямые субстраты, такие как Raptor, демонстрируя, что ND-646 не ингибирует активность AMPK (дополнительный рисунок 2 f ). Затем мы пришли к выводу, что ND-646 может способствовать дефосфорилированию P-Ser, что потенциально объясняет, почему ND-646 ингибирует обнаружение P-ACC. Мы обнаружили, что совместная обработка клеток A549 ND-646 и ингибитором фосфатазы Каликулин-A полностью восстанавливала обнаружение P-ACC (). Кроме того, мутация сайта связывания Arg172 в человеческом ACC1 в аланин (hACC1 R172A ), которая должна препятствовать связыванию P-Ser Arg, аналогично связыванию ND-646, привела к сверхэкспрессии общих уровней белка ACC, но невозможность обнаружения P-ACC в клетках ACC1 -KO HEK293T ().Обработка каликулином A полностью восстановила обнаружение P-ACC в клетках, экспрессирующих hACC1 R172A , что позволяет предположить, что несвязанный пептид P-Ser в hACC1 R172A является конститутивно дефосфорилированным (). Кроме того, аналогичная мутация в hACC2 (hACC2 R277A ) не влияла на способность AMPK фосфорилировать hACC2-BC по Ser222 in vitro (дополнительная фиг. 2 g ). Взятые вместе, эти данные предполагают, что связывание ND-646 с доменом BC ACC способствует его конститутивному дефосфорилированию, предотвращая способность AMPK-фосфорилированного пептида p-Ser связывать аргинин, так что пептид p-Ser больше не защищен от дефосфорилирование.Примечательно, что хотя дефосфорилирование ACC обычно активирует фермент, в присутствии ND-646 активность ACC остается подавленной, поскольку ACC не может димеризоваться. Эти результаты подтверждают механистическую гипотезу о том, что ингибирование активности ACC ND-646 имитирует физиологическую регуляцию функции ACC с помощью AMPK. Моделируя кристаллическую структуру ND-646, связанного с hACC2-BC, с предыдущими кристаллическими структурами сайта фосфорилирования AMPK 25 , мы могли визуализировать эффекты связывания ND-646 с ACC, которые способствуют его ингибированию и дефосфорилированию ().

Наконец, чтобы определить, можно ли использовать статус P-ACC для дополнения фармакокинетического анализа воздействия лекарств in vivo, мы обработали бестимусных голых мышей с подкожными опухолями A549 однократной пероральной дозой 25 мг / кг ND-646 и измерили уровни ND-646 в опухолевой ткани и иммуноблоттинг для P-ACC в определенные моменты времени в 1 час. и 8 ч. после дозирования. Воздействие на опухоль ND-646 было высоким (~ 15 мкМ) через 1 час после введения дозы, что коррелировало с полной потерей обнаружения P-ACC (дополнительные фиг.2 ч, я ). Однако уровни ND-646 в опухолях были значительно ниже (~ 0,9 мкМ) через 8 часов после однократной дозы ND-646, что соответствует короткому периоду полужизни ND-646 у мышей и способности обнаруживать p-ACC на на этот раз. Эти данные демонстрируют, что биомаркер P-ACC хорошо коррелирует с абсолютными уровнями воздействия ND-646 в опухолях, и предполагают, что несколько суточных доз ND-646 являются оптимальными для ингибирования ACC in vivo .

ND-646 ингибирует FASyn в клетках NSCLC in vitro

Учитывая ключевую роль ACC1 в регуляции de novo FASyn, мы выполнили метаболическое мечение с помощью [U- 13 C 6 ] глюкозы в обработанном ND-646 Ячейки A549 для измерения FASyn ().Аналогично генетической делеции ACC1 в клетках A549 и h257, ингибирование ACC ND-646 значительно подавляло процент вновь синтезированного пальмитата (C16: 0), демонстрируя, что ND-646 способствует почти полному отключению de novo. FASyn (). В соответствии с этим обработка ND-646 привела к потере окрашивания нейтральных липидов в масляный красный-O в клетках A549 и к снижению общего содержания жирных кислот на 90% в течение 72 часов (). Количественное определение отдельных жирных кислот выявило заметное уменьшение пулов ряда жирных кислот, включая преобладающие насыщенные жирные кислоты пальмитат и стеарат, после обработки ND-646 ().Обработка клеток A549 ND-646 не приводила к значительному изменению синтеза холестерина, демонстрируя, что ингибирование ACC не влияет на утилизацию ацетил-КоА не-FASyn путями (дополнительная фигура 3 a ). В совокупности эти данные метаболического потока демонстрируют, что, аналогично генетической делеции ACC1 , ингибирование ACC с помощью ND-646 приводит к сильному ингибированию FASyn и истощает клеточные уровни жирных кислот в клетках NSCLC.

ND-646 ингибирует FASyn in vitro и индуцирует апоптоз в клетках NSCLC

( a ) Синтез пальмитата в [U- 13 C 6 ] меченных глюкозой клетках A549, обработанных 500 нМ ND-608 или 500 нМ ND-646 в течение 24 часов.

( b ) Количественное определение содержания жирных кислот в клетках A549, обработанных 500 нМ ND-608 или 500 нМ ND-646 в течение 72 часов. На вставленных изображениях показано окрашивание клеток A549 Oil-Red-O. Масштабная шкала = 50 мкм

( c ) Процент снижения индивидуальных жирных кислот в клетках A549 через 72 часа.

( d ) Рост клеток A549 (слева) и h560 (справа), обработанных носителем, 500 нМ ND-608 или ND-646 в среде, содержащей либо обычный FBS, либо делипидированный FBS. Число клеток показано на 7 день после обработки, нормированное на процент носителя.

( e ) Жизнеспособность клонов A549 (слева) и h257 (справа) WT или ACC1 -KO, обработанных 500 нМ ND-646. Процент жизнеспособности, приведенный к транспортному средству WT.

( f ) Клеточный рост клеток A549, совместно обработанных в делипидированной FBS либо с 500 нМ ND-608, либо с 500 нМ ND-646 и 200 мкМ пальмитатом (PA).

( г ) Изображения клеток A549 на 7 день после обработки. Масштабная полоса = 50 мкм

( ч ) Экспрессия расщепленного PARP в клетках A549, обработанных либо 500 нМ ND-608, либо 500 нМ ND-646 в среде, содержащей обычный FBS, через 3, 4 или 5 дней после обработки.Стрелка обозначает молекулярную массу расщепленного PARP.

( i ) Спасение пальмитатом апоптоза и стресса ER в клетках A549, совместно обработанных 200 мкМ пальмитатом и 500 нМ ND-608 или 500 нМ ND-646 в средах, содержащих либо обычный FBS, либо делипидированный FBS в течение 5 дней.

Технические реплики варьировались от трех ( a d ) до шести ( e ) и показаны в одном из как минимум двух отдельных экспериментов. Все значения выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение. * Р <0.05 ** P <0,01 *** P <0,001 **** P <0,001 по отношению к контролю ND-608 или WT, определенному с помощью ANOVA с методом Тьюки для множественного сравнения ( d f ) или двустороннего студента t тест ( a c ).

ND-646 подавляет пролиферацию и цитотоксичен для клеток NSCLC. h560 NSCLC, демонстрируя, что ингибирование ACC ухудшает рост раковых клеток, что согласуется с результатами генетической делеции

ACC1 и согласуется с предыдущими исследованиями 16,17 .Кроме того, способность ND-646 ингибировать пролиферацию усиливалась, когда клетки культивировали в среде, содержащей делипидированный FBS ().

Примечательно, что обработка ND-646 клонов ACC1 -KO A549 и h257, выращенных в обычных или делипидированных FBS, не повлияла в дальнейшем на жизнеспособность клеток (), а совместная обработка клеток A549 ND-646 и пальмитатом восстановила жизнеспособность и полностью спасла клетки. антипролиферативные эффекты ингибирования ACC (и дополнительная фиг. 3 e ). Спасение пальмитата было также воспроизведено в клетках h560 (дополнительный рис.3 f ) и пальмитат не влияли на способность ND-646 ингибировать АЦЦ, поскольку совместное лечение с ND-646 приводило к потере детекции Р-АСС, демонстрируя, что АЦЦ эффективно ингибируется в клетках, спасенных пальмитатом (Дополнительный Рис.3 г ). Эти данные демонстрируют специфичность ND-646 в отношении ингибирования ACC, поскольку нельзя ожидать, что пальмитат спасет какие-либо неожиданные нецелевые эффекты ND-646.

Обработка клеток A549 ND-646 привела к индукции апоптоза () и стресса ER (дополнительный рис.3 ч ). Ингибирование ACC привело к увеличению фосфорилирования α-субъединицы фактора инициации трансляции 2 эукариот по серину 51 (P-EIF2α S51 ), а также к увеличению экспрессии CHOP. Совместная обработка клеток A549 с ND-646 и пальмитатом полностью снимала эффекты ND-646 на стресс ER и апоптоз (2). Взятые вместе, эти данные предполагают, что антипролиферативные эффекты ND-646 обусловлены ингибированием FASyn и истощением клеточных жирных кислот

ND-646 ингибирует FASyn и рост опухоли в ксенотрансплантатах NSCLC

Наши фармакокинетические исследования показали, что ND- 646 будет более эффективным при введении нескольких дневных доз.Таким образом, чтобы изучить влияние хронического лечения ND-646 на рост опухоли NSCLC и определить эффективность дозирования два раза в день, мы лечили бестимусных голых мышей с установленными подкожными опухолями A549 перорально любым носителем два раза в день (BID), 25 мг / сут. кг ND-646 один раз в день (QD), 25 мг / кг ND-646 BID или 50 мг / кг ND-646 QD в течение 31 дня (). ND-646 в дозе 25 мг / кг QD был неэффективен при ингибировании роста опухоли. Однако ND-646, вводимый в дозе 25 мг / кг 2 раза в сутки или 50 мг / кг 1 раз в сутки, значительно ингибировал подкожный рост опухоли A549 ().ND-646 хорошо переносился на протяжении всего периода лечения, без существенной потери веса после продолжительного приема ND-646, что позволяет предположить, что максимальная переносимая доза (MTD) не была достигнута (дополнительный рисунок 4 a ). Мышей умерщвляли через 1 час после последней дозы, и ткани готовили либо для иммуногистохимии (IHC), либо для иммуноблот-анализа. Опухоли, обработанные всеми дозами ND-646, потеряли обнаружение P-ACC через 1 час, демонстрируя эффективное проникновение в опухоль и острое ингибирование ACC ND-646 (и дополнительный рис.4 б ). Примечательно, что только при дозах ND-646, которые приводили к значительному подавлению роста опухоли (25 мг / кг два раза в сутки и 50 мг / кг один раз в сутки), наблюдалось значительное повышение экспрессии P-EIF2α S51 в опухолевых лизатах (), что позволяет предположить, что P-EIF2α S51 может быть терапевтическим биомаркером, отражающим ингибирование роста опухоли, а P-ACC — биомаркером взаимодействия с мишенью ACC в этих условиях. Поддерживая противоопухолевые свойства ND-646 в дозе 25 мг / кг BID и 50 мг / кг QD в этой модели, опухоли уменьшили окрашивание Ki67 (дополнительный рис.4 b , c ).

ND-646 ингибирует FASyn и рост опухоли в моделях ксенотрансплантатов NSCLC

( a ) Схема дизайна исследования ND-646 в подкожных опухолях A549

( b ) Рост опухолей A549, обработанных носителем BID (n = 8 мышей) или ND-646 в дозе 25 мг / кг QD (n = 9 мышей), 25 мг / кг BID (n = 8 мышей) или 50 мг / кг QD (n = 10 мышей).

( c ) График объема опухолей в виде квадратов и усов в конце исследования (42 день). Изображения на вставке являются репрезентативными для мышей, которым вводили носитель и мышей ND-646 в дозе 25 мг / кг BID.Масштабная линейка = 1 см.

( d ) Анализ P-ACC и P-EIF2α S51 в опухолях A549. . Цифры представляют отдельные опухоли от отдельных мышей.

( e ) Схема маркировки 2 H 2 O для измерения FASyn в опухолях легких A549 (n = 4 мыши на обработку).

( f ) Фракционный синтез de novo пальмитата (C16: 0) и стеарата (C18: 0) (слева) и максимальная скорость потока синтеза (справа) показаны в опухолях легких A549 (n = 12 опухолей на лечение )

( г ) Схема дизайна исследования ND-646 на опухолях легких с ксенотрансплантатом A549.

( ч ) Рост опухолей легких A549, обработанных носителем BID (n = 9 мышей), ND-646 50 мг / кг BID (n = 7 мышей) или 100 мг / кг BID (n = 9 мышей) или карбоплатин (n = 9 мышей).

( i ) Количественное определение площади опухоли в процентах от общей площади легких. Показана средняя площадь опухоли за лечение.

Числа на графиках ( c , f , i ) представляют собой процентное снижение по сравнению с контролем транспортного средства. Все значения выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение.* P <0,05 ** P <0,01 *** P <0,001 относительно контроля носителя, определенного с помощью двустороннего t-критерия Стьюдента. Эксперименты проводились один раз для каждого анализа.

Затем нас интересовало влияние ND-646 на опухоли легких, растущие в их естественном микроокружении в легких. Чтобы определить, ингибирует ли ND-646 функционально FASyn in vivo , мы вводили дейтерированную воду ( 2 H 2 O) мышам с опухолями легких A549 для количественного определения включения дейтерия во вновь синтезированные жирные кислоты в опухолях в качестве меры FASyn. (). 2 H 2 O включается в ряд биосинтетических промежуточных продуктов, необходимых для производства жирных кислот, и маркирует только вновь синтезированные жирные кислоты 29 . Мы вводили люциферазу, экспрессирующие клетки A549, внутривенно мышам SCID / Beige, чтобы вызвать колонизацию легких и рост опухоли легких. Опухоли легких A549 выращивали в течение 42 дней, а затем мышам давали 2 H 2 O (онлайн-методы) и одновременно лечили носителем или ND-646 в дозе 50 мг / кг BID в течение 7 дней () .Через 7 дней мышей умерщвляли, опухоли собирали и анализировали на FASyn. Обогащение дейтерием в плазме H 2 O было сходным у животных, обработанных носителем и ND-646, и обогащения было достаточно для количественного определения FASyn (дополнительный рисунок 4 d ). Затем мы измерили массовое распределение изотопологов общего пальмитата и стеарата, собранных из опухолей A549, и рассчитали фракционный синтез жирных кислот (% от общего пула пальмитата / стеарата, который синтезируется в течение периода мечения) для каждого, как подробно описано в Методах.Приблизительно 55% измеренного пальмитата в опухолях легких A549, обработанных носителем, были вновь синтезированы в течение этих 7 дней, что позволяет предположить, что опухоли A549 подвергаются высокому уровню de novo FASyn (). Более того, обработка ND-646 привела к значительному снижению процентного содержания вновь синтезированных пальмитата и стеарата, демонстрируя, что FASyn снижается с помощью ND-646 в опухолях легких A549 (2). Хотя приведенный выше анализ рассчитывает долю вновь синтезированных пулов общих жирных кислот в опухолях, он не принимает во внимание изменения размеров молярных пулов этих жирных кислот.Таким образом, чтобы определить максимальную скорость потока FASyn в опухолях (при условии, что синтез происходит полностью внутри опухоли, а обмен / окисление минимальны), мы рассчитали молярное количество вновь синтезированной жирной кислоты на мг опухоли в день: 2 H 2 O маркировка. Хотя эта модель предполагает, что меченый пул пальмитата и стеарата синтезирован недавно, также возможно, что меченные дейтерием пальмитат и стеарат также извлекаются из плазмы и окружающей микросреды.Таким образом, мы выразили это значение синтеза как максимальную скорость синтеза с учетом источников за пределами опухоли. Мы обнаружили, что ND-646 приводил к значительному снижению максимальной скорости FASyn пальмитата (60%) и стеарата (46%) в опухолях легких A549 ().

Затем мы исследовали специфическое влияние хронического лечения ND-646 на рост опухолей легких A549 NSCLC. Учитывая, что хроническое лечение ND-646 хорошо переносилось в дозах, используемых в наших предыдущих исследованиях, мы решили проверить доклиническую эффективность ND-646 в дозе 50 мг / кг два раза в сутки, а также в более высокой дозе 100 мг / кг два раза в сутки.Кроме того, мы включили карбоплатин, который является стандартным аналогом платины, применяемым при лечении НМРЛ, в отдельную группу для прямого сравнения. Рост опухоли легкого A549 отслеживали в течение 3 недель после внутривенной инъекции с помощью биолюминесцентной визуализации (BLI), а затем мышей случайным образом распределяли по группам лечения и получали хронические дозы в течение 6 недель (). ND-646 переносился в течение периода лечения, и мы отметили снижение массы тела на 10% у мышей, получавших дозу ND-646 в дозах 50 мг / кг два раза в сутки и 100 мг / кг два раза в сутки по сравнению с носителем (дополнительный рис.4 и ). Обработка ND-646 подавляла рост опухолей легких A549 при дозах 50 мг / кг BID и 100 мг / кг BID по сравнению с обработкой носителем (). Опухоли мышей, обработанных носителем, показали 60-кратное увеличение биолюминесценции в течение периода лечения по сравнению с опухолями мышей, обработанных 50 мг / кг и 100 мг / кг ND-646, которые увеличились в 33 и 23 раза соответственно. (Дополнительный рис. 4 fg ). Затем мы подготовили окрашенные H&E срезы фиксированных формалином легких для анализа гистопатологических изменений опухолей легкого A549 (дополнительный рис.4 ч ). Обработка ND-646 привела к 80% (50 мг / кг два раза в день) и 82% (100 мг / кг два раза в день) снижению общей опухолевой нагрузки в легких по сравнению с таковой у мышей, получавших носитель (), что было заметно больше, чем у мышей, получавших носитель. снижение общего количества опухолей в легких у мышей, получавших карбоплатин (52%) в этом режиме дозирования. Морфометрический анализ размера опухоли показал, что обработка ND-646 привела к уменьшению среднего размера опухоли на 47% (50 мг / кг BID) и на 43% (100 мг / кг BID) по сравнению с лечением носителем (дополнительный рис.4 и ). Количественное определение окрашивания BrdU на срезах легких с использованием расширенного программного обеспечения для анализа изображений (InForm-Perkin Elmer) показало, что обработка ND-646 привела к снижению среднего показателя на 39% (50 мг / кг два раза в сутки) и на 49% (100 мг / кг два раза в сутки). количество BrdU-положительных клеток в каждой опухоли (дополнительный рис. 4 j – k ). Кроме того, P-ACC IHC подтвердил потерю обнаружения P-ACC в опухолях, обработанных ND-646 (дополнительная фигура 4 j ). Взятые вместе, эти данные демонстрируют, что ND-646 вреден для роста опухолей NSCLC в доклинических моделях ксенотрансплантата легких.

ND-646 ингибирует FASyn опухоли и рост в моделях мышей, созданных с помощью генной инженерии.

Затем мы определили, ингибирует ли ND-646 FASyn в автохтонных опухолях легких, полученных из Kras LSLG12D ; Trp53 fl / fl ; R26 LSLluc (KP luc ) и Kras LSLG12D ; Stk11 fl / fl ; R26 LSLluc (KL luc ) генно-инженерные модели мышей NSCLC 30 . В этих моделях опосредованная аденовирусом экспрессия рекомбиназы Cre (Ad-Cre) в эпителии легких (посредством интраназальной инстилляции) индуцирует онкогенную активацию Kras G12D , которая сочетается с делецией либо Trp53 (который кодирует p53), либо серин-треонинкиназы. 11 (Stk11; более известный как Lkb1), а также к экспрессии люциферазы из локуса Rosa26 (R26 LSLluc ) в той же эпителиальной клетке, что приводит к образованию опухоли легких, которую можно отслеживать в долгосрочном плане с помощью BLI.Мы инициировали онкогенез легких у мышей KP luc и KL luc и позволили опухолям легких сформироваться в течение 56 дней; затем мы одновременно вводили 2 H 2 O и либо носитель BID, либо ND-646 в дозе 50 мг / кг BID мышам в течение 7 дней (онлайн-методы). Через 7 дней мышей умерщвляли, и опухоли легких собирали для анализа на FASyn (). Кроме того, мы собирали плазму, чтобы определить влияние ND-646 на уровни циркулирующих жирных кислот в плазме. Анализ обогащения дейтерием плазмы H 2 O продемонстрировал аналогичное обогащение между группами лечения и достаточное обогащение для анализа FASyn (дополнительный рис.5 а ). Подобно тому, что наблюдалось с опухолями легких A549, фракционный синтез пальмитата в опухолях легких у мышей KP luc и KL luc , обработанных носителем, был высоким, демонстрируя, что опухоли легких KP luc и KL luc имеют высокую скорость. of de novo FASyn (дополнительный рисунок 5 b ). В соответствии со сниженным фракционным синтезом, обработка мышей ND-646 привела к значительному снижению максимальной скорости синтеза пальмитата и стеарата в опухолях легких KP luc и KL luc (), а также к значительному снижению уровней общее количество жирных кислот (дополнительный рис.5 c, d ) и свободных жирных кислот (FFA) (и дополнительная фиг. 5 e ) в опухолях. Наконец, обработка ND-646 также значительно снижала уровни ряда насыщенных и ненасыщенных FFA в плазме мышей KP luc и KL luc (и дополнительная фиг. 5 f ).

ND-646 ингибирует FASyn в опухолях легких Kras G12D p53 — / — и Kras G12D Lkb1 — / — мышиных моделей НМРЛ и снижает содержание свободных жирных кислот в плазме

( a ) Схема из 2 H 2 O-мечение для количественного определения FASyn в автохтонных опухолях легких KP luc и KL luc (n = 4–5 мышей на обработку).

(b ) Максимальная скорость синтеза пальмитата (C16: 0) и стеарата (C18: 0) в опухолях легких KP luc (слева) и опухолях легких KL luc (справа) после 1 недели ND- 646 обращения (ПО). Анализировали 3 опухоли на мышь. Общее количество проанализированных опухолей показано на графике. Цифры над столбиками представляют собой процентное снижение по сравнению с обработкой транспортного средства.

( c ) Количественное определение отдельных свободных жирных кислот (FFA) в опухолях легких KP luc и ( d ) KL luc опухолях легких.Левая панель показывает FFA с высоким содержанием, а правая панель показывает FFA с низким содержанием.

( e ) Количественное определение отдельных свободных жирных кислот (FFA) в плазме мышей KP luc и ( f ) KL luc . Левая панель показывает FFA с высоким содержанием, а правая панель показывает FFA с низким содержанием.

Количество опухолей и образцов плазмы, проанализированных за эксперимент, показано на графиках. Эксперименты проводились один раз для каждого анализа. Все значения выражены как средние ± s.Эм. * P <0,05 ** P <0,01 *** P <0,001 относительно обработки носителем, определяемой двусторонним t-критерием Стьюдента. # Представляет значения p> 0,05 p <0,1. Точные значения p ( c f ) и% снижения свободных жирных кислот показаны на дополнительном рис. 5e – f.

Наконец, мы исследовали влияние хронического дозирования ND-646 на рост опухоли легких на этих моделях мышей. Мы индуцировали опухоли легких у мышей KP luc и KL luc , позволяли опухолям развиваться в течение 35 дней, а затем рандомизировали мышей в группы лечения, которые состояли из носителя BID, ND-646 50 мг / кг или 100 мг / кг BID. , карбоплатин 25 мг / кг каждые 3 дня или комбинированная терапия ND-646 50 мг / кг два раза в сутки + карбоплатин ().Мышам давали хронические дозы в течение 6 недель и контролировали с помощью BLI на предмет роста опухоли легкого и ответа на терапию. Мы отметили снижение массы тела на 10% у мышей KP luc и KL luc , длительно получавших ND-646, однако масса тела поддерживалась на этом сниженном уровне в течение всего периода лечения (дополнительный рисунок 6 a ). Небольшая подгруппа мышей KP luc и KL luc , которым вводили дозу ND-646 в дозе 100 мг / кг два раза в сутки, развила фенотип умеренного косоглазия, начиная с 4 недель лечения.Мы обнаружили снижение биолюминесценции опухоли легких (поток фотонов) у мышей KP luc и KL luc , которым вводили дозу ND-646, по сравнению с таковым у мышей, получавших носитель (и дополнительный рис. 6 b ). Примечательно, что BLI выявил, что лечение карбоплатином вызывало более высокий противоопухолевый ответ у мышей KL luc , чем у мышей KP luc ; однако лечение комбинацией ND-646 + карбоплатин привело к улучшенному ответу по сравнению с монотерапией в обеих моделях ().Лечение комбинацией ND-646 + карбоплатин привело к большему снижению массы тела, чем монотерапия любым из этих препаратов; однако вес тела поддерживался на этом сниженном уровне в течение периода лечения (дополнительный рисунок 6 a ). Чтобы оценить влияние ND-646 на онкогенез легких на гистологическом уровне, мы приготовили окрашенные H и E срезы легких от каждой мыши в каждой группе лечения (). Обработка ND-646 привела к значительному снижению общей опухолевой нагрузки по сравнению с обработкой носителем ().Однако, в то время как средний размер опухоли был значительно уменьшен после лечения ND-646 в опухолях KP luc , уменьшение опухолей KL luc было гораздо более скромным (), демонстрируя, что в качестве единственного агента ND-646 имеет большее влияние на размер опухоли в опухолях мышей KP luc , чем в опухолях мышей KL luc . Объединяя опухоли легких KP luc и KL luc в шесть диапазонов размеров, мы обнаружили, что ND-646 подавлял рост больших опухолей у мышей KP luc , эффект, который не был очевиден у мышей KL luc , которые отсутствовали большие опухоли в целом (), демонстрируя, что ингибирование ACC предотвращает разрастание больших опухолей KP luc .Следует отметить, что лечение карбоплатином привело к снижению общей опухолевой нагрузки как у мышей KL luc , так и у мышей KP luc , хотя оно было менее эффективным, чем лечение ND-646 в любом из испытанных условий, за исключением опухолей KL luc . (Дополнительный рис. 6 c ). Обработка карбоплатином индуцировала накопление ядерного p53 в опухолях KL luc , предполагая, что повышенная эффективность препарата, наблюдаемая в опухолях KL luc , может происходить через p53-зависимый механизм подавления роста (дополнительный рис.6 д ).

ND-646 подавляет рост опухоли Kras G12D p53 — / — и Kras G12D Lkb1 — / — автохтонный рост опухоли NSCLC

( a ) Схема доклинического исследования ND-646 в дизайне доклинического исследования Kras G12D / + p53 fl / fl (KP luc ) и Kras G12D / + LKB1 fl / fl (KL luc ) генетические модели опухолей NSCLC

( b наложение изображений) Биолюминесценция эффективности ND-646 в опухолях легких KP luc (слева) и KL luc (справа).Изображения являются репрезентативными для каждого условия лечения. Масштабная линейка = 1 см.

( c ) Кратное изменение потока фотонов для каждой группы в течение периода лечения (с 35 по 77 день). KP luc (вверху) и KL luc (внизу).

( d ) Типичные окрашенные H&E срезы опухолей легких KP luc и ( e ) KL luc из каждой группы лечения. Показано количество животных (n) для каждого условия обработки. Масштабная линейка = 5000 мкм

( f ) Анализ опухолевой нагрузки у мышей, обработанных KP luc (вверху) и KL luc (внизу).Площадь опухоли рассчитывалась как процент от общей площади легких. Показана средняя площадь опухоли за лечение.

( г ) Средний размер опухоли ( 2 мм) у мышей KP luc (вверху) и KL luc (внизу).

( h ) KP luc (слева) и KL luc (справа) опухоли, распределенные по размеру (от g ) и проценту опухолей внутри каждого размера, представленного для каждого условия лечения.

( i ) BrdU-положительность опухолей KP luc (вверху) и KL luc (внизу) от каждого лечения (шкала log2).% BrdU-положительных клеток на опухоль определяли количественно, и каждая точка представляла отдельную опухоль (n = 48–262 опухоли на лечение).

Количество мышей на группу обработки показано в ( d , e ). Для ( г, ч ) количество проанализированных опухолей варьировалось от 46 до 327 в зависимости от условий лечения (см. Исходные данные). Все значения выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение. * P <0,05 ** P <0,01 *** P <0,001 относительно контроля носителя, определенного с помощью теста Манна-Уитни ( f , g ) или ANOVA с методом Тьюки для множественного сравнения ( i ).

Лечение комбинацией ND-646 + карбоплатин привело к выраженному противоопухолевому ответу как в опухолях KP luc , так и в опухолях KL luc (). Количественное определение BrdU выявило значительное снижение BrdU-положительности опухолей, обработанных ND-646 отдельно или в комбинации с карбоплатином, у мышей KP luc и KL luc (и дополнительный рисунок 6 e ). Как и ожидалось, ND-646 также приводил к потере обнаружения P-ACC в опухолях (дополнительная фигура 6, и ).Наконец, лечение ND-646 привело к значительному снижению количества насыщенных и ненасыщенных жирных кислот в печени и плазме через 6 недель (дополнительный рис. 6 f, g ).

Хлорид имидазолия 3-метил-1-сульфоновой кислоты в качестве нового, эффективного и пригодного для повторного использования катализатора и растворителя для получения N-сульфонилиминов при комнатной температуре

  • [1] a)

    RD Rogers, Ионные жидкости как зеленые растворители: Прогресс и перспектива, Публикация Американского химического общества, 2005 г.

    Google Scholar

  • б)

    К.Миками, Зеленые реакционные среды в органическом синтезе; Blackwell Publishing, UK, Oxford, 2005

    Книга

    Google Scholar

  • c)

    П. Вассершайд, Т. Велтон, Ионные жидкости в синтезе; Wiley-VCH, Weinheim, 2003

    Google Scholar

  • d)

    A. Zare, A. Hasaninejad, A.R. Мусави Заре, А. Пархами, Х. Шарги, А. Халафи-Нежад, Кан. J. Chem. 85 (2007) 438

    CAS

    Google Scholar

  • д)

    А.Заре, А. Хасанинеджад, А. Халафи-Нежад, А. Моосави Заре, А. Пархами, ARKIVOC xiii (2007) 105

    Google Scholar

  • f)

    М. Дабири, П. Салехи, М. Багбанзаде, М. Шакури, С. Отокеш, Т. Экрами, Р. Дусти, Дж. Иран. Chem. Soc. 4 (2007) 393

    CAS

    Google Scholar

  • г)

    М. Mojtahedi, M.S. Абаи, Х. Аббаси, Дж. Иран. Chem. Soc. 3 (2006) 93

    Статья
    CAS

    Google Scholar

  • ч)

    А.Шарифи, М. Абаи, М. Мирзаи, Р. Салими, Дж. Иран. Chem. Soc. 5 (2008) 135

    Статья
    CAS

    Google Scholar

  • i)

    M.M. Ходай, А. Хосропур, С. Гадери, Дж. Иран. Chem. Soc. 3 (2006) 69

    Статья
    CAS

    Google Scholar

  • j)

    A. Zare, A. Hasaninejad, A. Khalafi-Nezhad, A.R. Моосави-Заре, М. Бейзави, Ф. Хедри, Ф. Асади, Н. Хаяти и А.Асифи, Дж. Иран. Chem. Soc. 7 (2010) 461

    CAS

    Google Scholar

  • k)

    A.R. Хосропур, М. Khodaei, S. Ghaderi, J. Iran. Chem. Soc. 5 (2008) 407.

    CAS

    Google Scholar

  • [2] a)

    A. Zare, A. Parhami, A.R. Мусави-Заре, А. Хасанинеджад, А. Халафи-Нежад, М.Х. Бейзави, Кан. J. Chem. 87 (2009) 416

    CAS

    Google Scholar

  • б)

    А.Заре, А. Мусави-Заре, А. Хасанинеджад, А. Пархами, А. Халафи-Нежад, М.Х. Бейзави, Synth. Commun. 39 (2009) 3156

    CAS

    Google Scholar

  • c)

    J.R. Harjani, S.J. Нара, М. Салунхе, Tetrahedron Lett. 43 (2002) 1127

    CAS

    Google Scholar

  • г)

    В.В. Намбудири, Р. Varma, Chem. Commun. (2002) 342

    Google Scholar

  • д)

    В.Р. Кох, Л.Л. Миллер, Р.А. Osteryoung, J. Am. Chem. Soc. 98 (1976) 5277

    CAS

    Google Scholar

  • f)

    М. Дабири, П. Салехи, М. Багбанзаде, М. Шакури, С. Отокеш, Т. Экрами, Р. Дусти, Дж. Иран. Chem. Soc. 4 (2007) 393

    CAS

    Google Scholar

  • g)

    G. Zhao, T. Jiang, H. Gao, B. Han, J. Huang, D. Sun, Green Chem. 6 (2004) 75

    CAS

    Google Scholar

  • h)

    C.Дж. Адамс, М.Дж. Эрл, Дж. Робертс, К.Р. Seddon, Chem. Commun. (1998) 2097

    Google Scholar

  • i)

    H.-P. Чжу, Ф. Ян, Дж. Тан, М.-Й. Он, Green Chem. 5 (2003) 38

    CAS

    Google Scholar

  • j)

    Х. Таджик, К. Никнам, Ф. Парса, Дж. Иран. Chem. Soc. 6 (2009) 159

    Статья
    CAS

    Google Scholar

  • к)

    р.С. Бхосале, С. Сарда, Р.П. Гирам, Д.С. Раут, С.П. Парве, С.С. Ардхапуре, Р.П. Павар, J. Iran. Chem. Soc. 6 (2009) 519

    Статья
    CAS

    Google Scholar

  • l)

    A. Shaabani, R. Ghaderi, A. Rahmati, A.H. Rezayan, J. Iran. Chem. Soc. 6 (2009) 710.

    Статья
    CAS

    Google Scholar

  • [3] a)

    См. Обзоры; П. Салехи, М.А.Зольфигол, Ф. Ширини, М.Багбанзаде. Curr. Орг. Chem. 10 (2006) 2171)

    CAS

    Google Scholar

  • b)

    Ф. Ширини, М.А.Зольфигол, П. Салехи, М. Абдини, Curr. Орг. Chem. 12 (2008) 183.

    CAS

    Google Scholar

  • [4] а)

    R. Bloch, Chem. Ред.98 (1998) 1407

    CAS

    Google Scholar

  • б)

    Х. Миябе, М. Уэда, Т.Найто, Синлетт (2004) 1140

    Google Scholar

  • c)

    S. Kobayashi, H. Ishitani, Chem. Ред. 99 (1999) 1069.

    CAS

    Google Scholar

  • [5] a)

    A. Vass, J. Dudas, R.S. Варма, Tetrahedron Lett. 40 (1999) 4951

    CAS

    Google Scholar

  • б)

    С.М. Вайнреб, Топ. Curr. Chem. 190 (1997) 131

    CAS

    Google Scholar

  • в)

    М.Гохайн, Синлетт (2003) 2097

    Google Scholar

  • d)

    Д. Эндерс, У. Рейнхольд, Тетраэдр: Асимметр. (1997) 1895.

    Google Scholar

  • [6]

    H.-K. Йим, H.N.C. Wong, J. Org. Chem. 69 (2004) 2892.

    CAS

    Google Scholar

  • [7]

    Х. Нисикори, Р. Йошихара, А. Хосоми, Синлетт (2003) 561.

    Google Scholar

  • [8]

    D.Л. Богер, W.L. Корбетт, Т.Т.Керран, А.М. Каспер, J. Am. Chem. Soc. 113 (1991) 1713.

    CAS

    Google Scholar

  • [9]

    L.G. Арини, А. Синклер, П. Сзето, Р.А. Stockan, Tetrahedron Lett. 45 (2004) 1589.

  • [10]

    X.-T. Чжоу, Ю.-Р. Линь, Л.-Х. Дай, Дж. Сан, Л.-Дж. Xia, M.- H. Tang, J. Org. Chem. 64 (1999) 1331.

    CAS

    Google Scholar

  • [11]

    М.Дж. Мельник, С. Вайнреб, А. Фрейер, Tetrahedron Lett. 29 (1988) 3891.

    CAS

    Google Scholar

  • [12] a)

    А. Хасанинеджад, Х. Шарги, Фосфор, сера и кремний 182 (2007) 873

    CAS

    Google Scholar

  • б)

    до н.э. Любовь, P.S. Радже, Т. Уильямс, Синлетт (1994) 493

    Google Scholar

  • c)

    W.Б. Дженнингс, К.Дж. Лавли, Тетраэдр 47 (1991) 5561

    CAS

    Google Scholar

  • d)

    F.A. Davis, J.M. Kaminski, E.W. Kluger, H.S. Freilich, J. Am. Chem. Soc. 97 (1975) 7085

    CAS

    Google Scholar

  • e)

    F.A. Davis, U. Nadir, E.W. Kluger, T.C. Седергран, Т. Панунто, Р. Биллмерс, Р. Дженкинс, И.Дж. Турчи, W.H. Уотсон, Дж. Чен, М. Кимура, J. ​​Am. Chem.Soc. 102 (1980) 2000

    CAS

    Google Scholar

  • f)

    М. Хоссейни-Сарвари, Х. Шарги, С. Эбрахимпурмогаддам, ARKIVOC xv (2007) 255

    Google Scholar

  • g)

    A. Hasaninejad, A. Zare, J. Sulphur Chem. 28 (2007) 357

    CAS

    Google Scholar

  • h)

    А. Хасанинеджад, А. Заре, Х. Шарги, М.Шекухи, ARKIVOC xi (2008) 64

    Google Scholar

  • i)

    А. Халафи-Нежад, А. Пархами, А. Заре, А. Насролахи Ширази, А. Мусави Заре, А. Хасанинеджад, Кан. J. Chem. 86 (2008) 456

    CAS

    Google Scholar

  • j)

    A. Zare, A. Hasaninejad, M. Shekouhy, A.R. Moosavi Zare, Org. Prep. Процедуры. Int. 40 (2008) 457

    CAS

    Google Scholar

  • к)

    А.Hasaninejad, A. Zare, A.R. Мусави Заре, А. Пархами, Х. Шарги, А. Халафи-Нежад, Фосфор, сера и кремний 183 (2008) 2769.

    CAS

    Google Scholar

  • [13]

    D.L. Боргер, W.L. Corbett, J. Org. Chem. 57 (1992) 4777.

    Google Scholar

  • [14]

    B.M. Trost, C. Marrs, J. Org. Chem. 56 (1991) 6468.

    CAS

    Google Scholar

  • [15] а)

    р.Albrecht, G. Kresze, Chem. Бер. 97 (1964) 483

    CAS

    Google Scholar

  • b)

    R. Albrecht, G. Kresze, Chem. Бер. 98 (1965) 1431

    CAS

    Google Scholar

  • c)

    M.J. Melnick, A.J. Фрейер, С. Weinreb, Tetrahedron Lett. 29 (1988) 3891

    CAS

    Google Scholar

  • г)

    А.К. Макфарлейн, Дж.Thomas, A. Whiting, Tetrahedron Lett. 34 (1993) 2379.

    CAS

    Google Scholar

  • [16] a)

    A.M. Канадзава, Ж.-Н. Денис, А.Е. Грин, J. Org. Chem. 59 (1994) 1238

    CAS

    Google Scholar

  • b)

    J. Sisko, M. Mellinger, P.W. Шелдрейк, Н.Х. Бейн, Tetrahedron Lett. 37 (1996) 8113

    CAS

    Google Scholar

  • c)

    F.Chemla, V. Hebbe, J.-F. Нормант, Синтез (2000) 75

    Google Scholar

  • d)

    Z. Li, X. Ren, P. Wei, H. Wan, Y. Shi, P. Ouyang, Green Chem. 8 (2006) 433.

    CAS

    Google Scholar

  • [17]

    J.P. Wolfe, J.E. Ney, Org. Lett. (2003) 4607.

    Google Scholar

  • Solvente 646: технические характеристики, ГОСТ, cumpusizione

    Diluente 646 hè un diluente universal assai efficace, pensatu per l’usu cù una varietà di vernici и vernici.Grazie à questu, i revestimenti acquistanu una lucentezza addizionale dopu a siccatura. In questu articulu, amparerai:

    — chì hè u solvente 646;

    — характеристики;

    — ГОСТ, необходимые условия.

    Общие сведения о растворителях

    Марка Solvente 646 hè un liquidu chjaru è incolore (in certi casi pò avè una tinta giallastra), caratterizatu da un odore specificu. Плотность растворителя составляет 0,87 грамма на кубический метр. cm, n si congela micca è n guadagna micca viscosità.Если спонтанный акцент на температуре 403 градусов, более 59 градусов.

    Фабрика в соответствии с требованиями ГОСТ 18188-172. U solvente deve esse omogenu. Ùn deve micca mustrà turbidità è delaminazione. Inoltre, частичное присутствие в суспензии в жидком состоянии и в пермесе микса.

    Pruduttu in contenitori industriali, in contenitori di plastica è di vetro (bottiglie) di varie sizes.

    Solvente 646: caratteristiche tecniche, cumpusizione

    Hè un cumpostu volatile materia urganica.U solvente 646, chì e caratteristiche tecniche currispondenu по ГОСТ 18188-72, включая следующие компоненты:

    • толуол — 50%;
    • бутанол — 15%;
    • ацетату ди бутил — 10%;
    • этанол — 10%;
    • ацетон — 7%;
    • целлозольв этилику — 8%.

    Per via di a so cumpusizione, hè cunsideratu u materiale di disoluzione più attivu.

    Solvente 646 quaternu hà u seguitu:

    • i valori di volatilità per l’etere etilicu sò in u intervallu da 8-15;
    • номер коагуляции в меню 35%;
    • u numeru acidu n supera micca 0,06 мг КОН / г;
    • a proporzione d’acqua (seconddu Fischer) ùn hè più di 2%;
    • effettu diluente — dopu a siccatura, presenza di imbiancatura, di u film n hè micca osservata, u nitroenamel hè caratterizatu da una superficie liscia senza a presenza di macchie.

    Dove si tratta?

    E caratteristiche tecniche di u Solvente 646 permettenu di aduprà per travaglià cù varie vernici è vernici, cumprese nitrocellulosa, melaninoamide, gliftalica, acrilica, epossidica. Он добавлен в качестве дополнения к продукту из различных материалов, в зависимости от того, какой продукт является постоянным. Inoltre, stu reagente hè aghjuntu à stucchi, является грунтовкой для создания единого материала, предназначенного для обработки, оптимального для создания перфекционистов и поверхностей.

    In certi casi, u solvente R-646, chì e so caratteristiche tecniche currispondenu согласно ГОСТу, он содержит материалы для различных поверхностей или атрибутов лавы (для использования с технологическими сертификатами).

    Chì sò i vantaghji di u solvente 646?

    Принципиально важны для использования с маркой 646 ci sò i seguenti:

    • carattarizatu da a universal of l’applicazione;
    • assai altu putere di disoluzione;
    • aghjusta una lucentezza in pi à i rivestimenti;
    • faciule da aduprà;
    • на порте micca à brusgiature in casu di cuntattu cù superficia di a pelle;
    • formn forma micca macchie grasse nantu à e superfici trattate;
    • ,

    • — это испарение без запаха.

    Метод приложения

    U solvente hè aghjuntu à a vernice o vernice in piccule porzioni à u spessore è a viscosità richieste. À u listessu tempu, u mischju diluitu deve esse semper mischju. Siccomu u solvente he altamente attivu, una cura specific deve esse fatta quandu si travaglia cun ellu per ùn guastà u stratu inferiore di u rivestimentu.

    Precauzioni di Manipulazione di Solventi

    U travagliu deve esse realizatu in camere dotate di bona ventazione, postu chì a sustanza hè tossica (assignata à a terza classa di periculu).Inoltre, l’equipaggiu di prutezzione persunale cum’è un respiratore è guanti duveranu esse purtati quandu si manage u solvente 646. Он уже был создан для l’usu di l’occhiali di sicurezza.

    Se u reagent si mette nantu в виде таблеток, deve esse trattatu cù acqua (calda) è сапон. In casu di cuntattu cù a mucosa di l’ochju dopu u lavu, cunsultate un duttore.

    Datu chì stu solvente hè un materiale infiammabile, maneghjelu cù cura è n lasciate mai fiamme aperte, scintille, o fumà vicinu à i contenitori di reagenti.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *